克隆基因表达及基因干扰-修.pptVIP

克隆基因的表达及基因干扰;克隆基因的表达及基因干扰;克隆基因的表达及基因干扰;第一节 外源基因的表达;外源基因在宿主细胞中表达。;第一节 外源基因的表达;一、原核生物表达体系;（一）对外源目的基因的要求 1、不应具有5′端非编码区以及内含子结构 2、不能直接用真核基因组DNA. 3、常以cDNA为模板，设计引物，PCR扩增目的基因. ; 选择标志 启动子 ：乳糖启动子lac，色氨酸启动子trp等 翻译调控序列，如核糖体结合位点(SD序列)，及 翻译起始点和终止序列 多克隆位点(MCS) ;原核启动子;consensus sequences;核糖体结合位点（ribosome binding site, RBS）;（三）真核生物基因在原核细胞中的表达; 1.非融合型表达蛋白 载体表达出的外源基因蛋白质不与细菌的任何蛋白 质融合在一起。 优点：表达的非融合蛋白与天然状态下存在的蛋 白在结构、功能以及免疫原等方面基本一致 缺点：易被细菌蛋白酶破坏 ;常用的非融合型表达蛋白原核表达载体pKK223-3 抗氨苄青霉素基因 tac启动子(trp-lac) SD序列 AUG起始密码 转录终止序列T1和T2 ;2.融合型表达蛋白 表达出的外源基因产物蛋白是与质粒载体上的菌体蛋白连接在一起的