酵母转化手册(译自Yeastmaker.pdfVIP

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本手册仅供学习交流,不做其他用途,如需 word 版本请发送站内信。  酵母转化手册  译自 Clontech  Yeastmaker™ Yeast Transformation  System 2   User Manual (PT1172‐1)  目录  1. 简介  2. 组分内容  3. 所需的附加材料  A .Clontech 的 Ready‐to‐Go Media Pouches  B.培养基配方  4. 酵母转化所需溶液  5. 酵母菌株储存条件  6. 酵母转化方法  A .方法:酵母感受态细胞的制备  B.方法:转化酵母感受态细胞  C .方法:涂板、判定转化效率  7. 参考文献    图表  表 1:酵母转化实验所需要的培养基组分                                                      本本手册仅供学习习交流,不做其其他用途,如需 word 版本请请发送站内信。  1. 简介  Yeastmakerr™ Yeast TTransformaation System 2 提供了了一种高效效的 PEG/醋酸酸锂 酵母细胞转转化法,本方方法适用于所所有的酵母母转化,包括括酵母单杂交交系统和酵母母双 杂交系统。 此方法提供供了一种比常常规转化方方法更为高效效,转化效率率更高也更更为可信的技技术, 如果要筛文文库,较高的的转化效率是是必要的条条件,你的文文库包含的克克隆数越多,你 就越有可能能发现新的、、稀有的相互互作用,此方方法之所以较较其他方法法转化效率更更高, 是因为该方方法包含一个个特殊又重重要的步骤:在加入 DNAA 和DMSO 处处理后,加入入 YPD Plus 液体培培养基培养酵母细胞 ((帮助酵母细细胞摄取更多的质粒 DDNA)。使用此此方 5 法,可以获获得≥3 X 110 转化子/uug 质粒 DNA。   2. 组分内容      3. 所需的附加材材料  A .Clontechh 的 Ready‐too‐Go Media PPouches  Clontech 提供供提供预先混混合好的培养养基,以方便便使用  表 1 酵母转转化实验所需要的培养基组组分    本手册仅供学习交流,不做其他用途,如需 word 版本请发送站内信。  B.培养基的配法   配置好的培养基溶于 500mL ddH2O,121℃高压蒸汽灭菌 15min,在使用前要降 至常温,(液体培养基也可以过滤灭菌)。灭菌时间不能过长。   Clontech 公司提供的预先混合好的培养基不需要调 pH,但是如果配置使用的 ddH2O 偏酸性,就要将 pH 调到 5.8 。   关于培养基配置的更多细节可以查询 Clontech Yeast Media Protocol‐at‐a‐Glance  (PT4057‐2)。    4. 酵母转化所需溶液   1.1X TE/LiAc 溶液  先配置母液:10X TE buffer 和 1 M LiAc (10X),转化前再配置工作液,现配现用。  混合 1.1 mL 10X TE buffer 和 1.1 mL 1 M LiAc (10X),再加入 8.8mL 灭过菌的超纯水, 定容至 10mL,混合均匀。     PE

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