工业微生物菌种保藏专业技术标准.PPTVIP

节工业微生物菌种保藏技术 ;一、理想的菌种保藏方法应具备的条件;一、微生物菌种保藏; 由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。 对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。;国际重要菌种保藏机构;中国菌种保藏单位;二、工业微生物菌种保藏技术;菌种保藏方法;2.1 冷冻保藏 ;冷冻保藏种类 ;普通冷冻保藏技术(-20℃);;二、超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃);;三、液氮冷冻保藏技术 ;(二)液氮冷冻保藏微生物菌种的步骤 1．待冷冻保藏菌种悬液的制备 (1)从生长斜面制备菌悬液：每一斜面加入5ml含10％甘油的营养液体培养；用巴氏吸管吹吸斜面制成孢子及菌体细胞悬液；0.5～lml分装玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶。 ;; 2．控速冷冻 ． (1)将安瓿或液氮瓶置于铝盒或布袋中，然后置于一较大的金属容器中； (2)将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室中； (3)以1-2℃/min的致冷速度降温，直到温度达到相对温度之上几度的细胞冻结点(通常为-30℃)； (4)补加一定量的液氮至系统中，使细胞在冻结点时尽可能快地发生相变；;;(三)复苏 1．从液氮罐中取出所需的安瓿，立即置于冰浴中； 2．迅速将安瓿置于37-40℃水浴中，并轻轻摇动以加速解； 3．用巴氏吸管将安瓿中贮存培养物移接入含有2m1无菌液体培养基的试管中，用同一支吸管反复抽吸数次，然后取0.1-0.2ml (约4、8滴)转接入琼脂斜面上。;2.2 冻干保藏 ;培养物的冻干过程;冷冻真空干燥操作流程;(三)冻干菌种的保藏与再生;;2.3传代保藏;2.3 传代培养法;2、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。 将试管直立，置低温或室温下保存。 此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通细菌也可保藏1年左右。 3、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃冰箱存放。;矿物油中浸没保藏;;2.4 载体法;;2.4 基因工程菌的保藏;;不同菌种保藏方法比较;细菌的保藏;放线菌菌种的保藏;2.5 微生物活力和稳定性测定 ;;加速保藏试验可用于预测保藏过程中保藏培养物的稳定性。在一给定温度下通过对高温下短期活力丧失程度检测，可以用来预测嗜酸乳杆菌的稳定性。 成功的菌种长期保藏方法之有价值的指标包括在保藏6个月、1年或更长时间后存活百分率(或存活单位)。细胞群体的形态学特征或一些特别的生化特征应在菌种保藏前后保持同一性，以及实验室中、中试车间中和生产发酵中产品滴度的稳定性，后者极为重要。;第十节 菌种的衰退与复壮 ;;菌种衰退的表现;菌种衰退???实质;复壮的概念;二、菌种的衰退与复壮;实践中关于防止菌种衰退和进行复壮的经验 ;;（二）菌种的复壮 ;方法;