实验五、有丝分裂、细胞中微丝的显示与观察.ppt

细胞有丝分裂标本制备、细胞骨架标本观察 细胞分裂是细胞增殖的主要方式，即细胞进入增殖周期后，经过一定时间的准备，通过分裂的方式，将细胞物质和其他组成成分等量分配到两个子细胞的过程。 生物界中，细胞分裂大致有3种方式： 有丝分裂 体细胞增殖分裂的主要方式 无丝分裂 低等动物细胞中较常见，在 哺乳动物和人类等高等动物细胞中少见 减数分裂 生殖细胞成熟阶段的一种细胞分裂方式 有丝分裂是一个复杂而连续的动态变化过程，根据显微镜下特异的形态变化特点人为地将有丝分裂分为几个不同的时期： 间期 分裂期 前期 前中期 中期 后期 末期 胞质分裂 实验内容 做一张蚕豆苗根尖压片，观察并掌握显微镜下有丝分裂各时相的形态特点 观察一张葱根尖有丝分裂固定装片 观察细胞骨架装片 实验方法 取材：蚕豆苗根尖 消化：1N HCL 60°C水浴锅中软化10分钟 染色：取根尖于干净载玻片上，尽量将平端去掉，然后用镊子轻轻将其分散，滴加改良苯酚品红染液，染色15---20分钟 压片：注意方向垂直，不能碾片，然后按住盖玻片一角，用笔头对准标本敲击，使细胞和染色体铺展开来，形成单层 镜检 间期（Interphase） 明显的圆形或椭圆形细胞核，红色的染色质分布较均匀。可见较明显的核仁 胞质染色淡或无色。 分裂期（Mitosis） 前期（Prophase） 核膨大，核膜解体，核界线变的不再清晰； 核仁消失； 染色质凝集，形成丝状线状染色体 中期（Metaphase） 染色体聚集排列在细胞的中央，正面观成一直线，形成赤道板。 后期（Anaphase） 着丝粒纵裂为二，两条染色单体分开，形成两组染色体，分别移向细胞两极 末期（Telophase） 染色体到达两极，逐渐恢复染色质状态，核膜，核仁重新出现，纺锤体消失。 细胞骨架的显示与观察 一、实验目的 了解光镜下细胞骨架的基本形态结构。 二、实验用品 材料：盖片培养的成纤维细胞或洋葱表皮细胞、 器材：光学显微镜、镊子、小平皿、载玻片、吸水纸、37℃恒温箱。 试剂： PBS液（PH7.2）2%tritonX-100液、M-缓冲液，3%戊二醛液、0.2%考马斯亮兰染液 实验原理 当细胞用triton“X”—100溶液处理，能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，有利于微丝的显示，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束 方法 1.在培养人皮肤纤维细胞进行继代培养时，将消毒的薄玻片放入培养瓶中，当生长在玻片条上的细胞尚未致密时，取玻片条放入小培养皿中，或将0.5×0.5cm大小的洋葱表皮细胞置于小培养皿中，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤3次，每次3分钟。 2. 将玻片条（洋葱表皮细胞）浸在2%triton“X”-100液中，置于37℃恒温箱处理20~30分钟，以除掉骨架以外的蛋白质。 3.立即用M—缓冲液轻轻地洗涤3次，每次3分钟，使细胞骨架稳定。 4.在3%戊二醛液中固定10分钟，再以PBS液洗3次，每次5分钟，吸去多余液体。 5.滴加0.2%考马斯亮兰染液染色20分钟，自来水冲洗，临时封片或空气干燥，二甲苯透明，树胶封片。 结果 实验报告 绘制细胞有丝分裂间期、前期、中期、后期、末期这五个时相中的任意四种图像 * * * * * 在光镜下可见一些充分伸展的成纤维细胞中，分布着被染成深兰色的细直纤维，这