颅内动脉瘤动物模型建立及发病机制的研究-外科学(神经外科)专业论文.docxVIP

四川大学临床医学博士学位论文颅内动脉瘤动物模型建立及 四川大学临床医学博士学位论文 颅内动脉瘤动物模型建立及 发病机制的研究 研究生 郭予大 导师 游潮教授 中文摘要 血管壁细胞外基质的大量破坏是颅内动脉瘤形成的重要因素，而细 胞外基质的破坏与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)尤 其MMP．9过度表达密切相关，同时伴有MMP的抑制剂(tissue inhibitor ofmetaUoproteinase，TIMP)表达升高，但二者的平衡失调致使MMP．9的 超量表达参与了颅内动脉瘤的发生及其发展。 巨噬细胞作为重要的炎症分子通过诱导MMP．9的表达参与了腹主 动脉瘤的形成，CD68作为巨噬细胞的分子标志常用于判断组织内炎症反 应的程度。此外研究表明MMP．9的过度表达与转录因子c-Jun有关，本 研究拟探讨诱导颅内动脉瘤血管壁内MMP．9的过度表达相关调控机制， 从颅内动脉瘤MMP．9诱导产生的早期阶段阻断其后继病理反应，为临床 开发新药或检测特异性病理分子标记物提示颅内动脉瘤形成早期提供有 用的实验依据。 自Hashimoto首次运用结扎大鼠一侧颈总动脉+切除一侧肾脏+术后 (高盐饮食+0一丙晴氨)喂养2月等综合措施成功建立颅内动脉瘤动物 模型后，该模型几经改进和完善，发现肾性高血压和血流动力学异常是 制作颅内动脉瘤发病机制模型的两大基本条件，制作的动物模型与人类 四川大学临床医学博^上学位论文颅内动脉瘤病理变化极其相似，且成功率高。但国内有关颅内动脉瘤发 四川大学临床医学博^上学位论文 颅内动脉瘤病理变化极其相似，且成功率高。但国内有关颅内动脉瘤发 病机制的动物模型文献报道相对极少，因此本课题首先建立稳定、类似 人类脑动脉瘤病理变化的颅内动脉瘤动物模型，并探讨MMP．9在大鼠脑 动脉瘤壁内是否表达，并对传统腹部切口手术入路进行改进，从而运用 颅内动脉瘤动物模型进一步研究该病的发病机制。 目的：检测CD68、e-Jun以及MMP一9mRNA在颅内动脉瘤和腹主动 脉瘤患者的表达及其临床意义。采用两种不同手术入路建立大鼠颅内动 脉瘤动物模型并对其比较，同时检测MMP．9在大鼠脑动脉瘤组织内表达 及其意义。 方法： 1．用常规光镜、电镜观察颅内动脉瘤患者血管壁细胞外基 质的形态学变化。2．应用免疫组化sP法检测人脑血管壁组织内CD68 和c．Jun表达水平和免疫活性。3．应用实时荧光定量RT-PCR检测脑动 脉瘤患者MMP一9mRNA的基因表达水平。4．采取双侧肾动脉后支结扎 +左侧颈总动脉结扎+术后2％盐水喂养建立大鼠脑动脉瘤动物模型， 并对经腹和背部不同手术入路制作颅内动脉瘤的切肾、感染、死亡和总 失败率进行比较。5．运用免疫组化SP法检测大鼠脑动脉瘤组织内 Mh但．9的表达。 结果：1．动脉瘤血管壁弹性纤维数目明显减少，纤维形态变短，排 列分布紊乱，部分区域被大片无细胞和纤维成分的玻璃样变结构所取代， 或纤维细胞之间为大片胶原及无定形的絮状物质。2．所有颅内动脉瘤和 腹主动脉瘤组织均有不同程度的巨噬细胞浸润(CD68阳性)，巨噬细胞 浸润程度与基质弹性纤维的损伤程度密切相关。3．15例脑动脉瘤和6例 腹主动脉瘤c．Jun免疫活性记分分别为1．92±0．51和1．67_+0．52，而正 常对照组为0．17±0．41，c-Jun在动脉瘤组织内表达较对照组有显著性 差异(p0．01)。4．颅内动脉瘤和腹主动脉瘤患者MMP一9mRNA的基因 四川大学临床医学博士学位论文表达的△Ct值分别为(3．67-1-1．11)和(3．17±0．75)，而正常对照组△ct值为 四川大学临床医学博士学位论文 表达的△Ct值分别为(3．67-1-1．11)和(3．17±0．75)，而正常对照组△ct值为 f7．oo±1．26)，MMP．9在不同组织基因表达的MMP．9基因表达水平有显 著性差异(仄O．01)，MMP．9基因在脑动脉瘤和腹主动脉瘤组织中的表 达分别是正常对照的10．06倍和14．22倍。5．实验组存活29只大鼠共发 现动脉瘤样改变13个(约40％)，其中右侧12个，左侧1个：诱导的颅 内动脉瘸血管壁组织光电镜下可见内弹力板断裂或分层变细乃至消失， 弹性纤维排列稀疏、紊乱，内皮细胞空泡变性或脱落消失，血管平滑肌 细胞数日减少，部分呈凋亡样形态变化。6．MMP．9在大鼠脑动脉瘤组 织内明显表达，对照组未见MMP．9阳性表达。7．经腹和经背两种手术 入路的切肾率和感染率差异有统计学意义(O．025p0．05)，经腹组高于 经背组，总失败率差异具有显著性的意义(0．005．o0．01)，经背组明显 低于经腹组。 结论：1．颅内动脉瘤形成与血管壁细胞外基质的破坏紧密相关，而 细胞外基质的破坏是由过度