林生地霉的形态学观察及体内药物敏感性实验研究-皮肤病与性病学专业论文.docxVIP

中文摘要2．1大体菌落观察取血液分离株置常温下复苏，3天后转 中文摘要 2．1大体菌落观察取血液分离株置常温下复苏，3天后转 种于SDA培养基，37℃和27℃温箱培养，每天观察菌落的 生长情况。 2．2光镜观察：分别取其丝状型和酵母样型菌落标本置于载 玻片上，lO％KOH溶液溶解后，盖上盖玻片，光镜下观察。 2．3扫描电镜观察：取两个温度下培养～周的菌落标本，置 于4％的戊二醛中固定，常规制片后在扫描电镜下观察。 2．4透射电镜观察：取两个温度下培养一周的菌落标本，置 于2．5％的戊二醛中固定，常规制片后在透射电镜下观察。 3体内药敏试验 3．1林生地霉系统感染动物模型的制作：取皮损分离株经复 苏转种后的菌落，用无菌生理盐水制备成菌悬液，通过腹腔 注射途径接种至应用环磷酰胺免疫抑制的小鼠。 3．2给药方法接种后2h开始给药，氟康唑、伊曲康唑、特 比奈芬均为1 Om∥(蟾．d)，腹腔注射，1天1次，连续5天。 3．3生存观察连续观察小鼠接种后21天内的自然死亡情 况，记录死亡日期和死亡只数。 3．4组织逆培养各脏器用组织研磨器研碎后挑取少许接种 于沙堡氏试管培养基，37℃温箱培养。 3．5肾脏组织载菌量(CFU)的测定 肾脏组织经研磨器研 碎后，用无菌生理盐水稀释至1ml，取10斗l组织悬液均匀 涂布于平皿培养基表面，48小时后读取菌落数。 结果： 1 DNA序列分析结果 血液分离株(Hebei．1)26S rDNA Dl／D2区序列分析，与皮损分离株(Changzheng—1)比较有 1个碱基的差异，与林生地霉模式菌株比较有4个碱基的差 中文摘要异，鉴定为林生地霉。基于26S 中文摘要 异，鉴定为林生地霉。基于26S rDNA D1／D2区序列分析的 系统发育树，结果显示Hebei一1菌株与Changzheng一1的亲 缘关系最近。 2大体菌落观察培养第2～3天，菌落开始生长，初为白色 绒毛样、粉末样，1～2周后菌落均转变为乳酪样，其中37℃ 下培养的菌落转变较早。 3光镜下观察菌丝相时，光镜下可见丰富的分支分隔菌丝、 成链的关节孢子和圆形、椭圆形小分生孢子。酵母相时，光 镜下可见丰富的单生或串生的芽生孢子，少量的厚膜孢子、 外生或内生的关节孢子，菌丝稀少。 4扫描电镜观察可见菌丝分支末端或侧面着生球形、棒状 的分生孢子，末端凹陷。 5透射电镜观察可见分生孢子与菌丝分离时全壁断裂，另 一端正在出芽。 6真菌逆培养结果 氟康唑和伊曲康唑治疗组小鼠心肺组 织真菌培养阳性率较特比萘芬治疗组和生理盐水对照组均 低，有显著性差异。余下各组中同一脏器的真菌逆培养阳性 率比较均无差异。 7肾脏组织载菌量 伊曲康唑和氟康唑治疗组中小鼠的肾 脏组织载菌量较特比萘芬治疗组和生理盐水对照组均有显 著减少；特比萘芬治疗组中小鼠的肾脏组织载菌量较生理盐 水对照组无显著性减少：氟康唑治疗组中小鼠的肾脏组织载 菌量较伊曲康唑治疗组显著减少。 结论： 1林生地霉血液株有丝状型和酵母样型两种菌落形态而皮 损株只有酵母样型。链状排列的矩形关节孢子、椭圆形或圆 中文摘要形的小分生孢子以及单生或串生的芽生孢子、厚膜孢子和分 中文摘要 形的小分生孢子以及单生或串生的芽生孢子、厚膜孢子和分 支分隔菌丝，为林生地霉形态学特征：有芽殖、外生和内生 节孢子，为其三种产孢类型。’ 2氟康唑、伊曲康唑在小鼠体内均具有良好的抗林生地霉活 性，提高了小鼠生存率和心、肺组织的真菌清除率，降低了 肾组织的载菌量，而特比萘芬无效；氟康唑清除小鼠肾组织 菌数的能力明显高于伊曲康唑，但在提高小鼠生存率和降低 组织真菌逆培养的阳性率方面，两者无明显差异。 关键词：林生地霉；形态学；电镜；体内药物敏感性： 实验研究 英文摘要Experimen 英文摘要 ExperimentEXDerlment researchreSearCn on0n thetne morphoIogymorDn0102V of0l GPD批^以，咒s办诳D缸and its sensitiVity t0 antifhngaI agents in—ViVo ABSTRACT ObjectiVe：GeD护f幽“聊 Jfl，记。肠， a new strain in GPD驴耙办扰耽，was 6rst isolated fbm Braz订ny and Indian oak silkworm in 2002．Then it was isolated行om a children’s kerion—like lesions and a patient’s blood sufjE；。1．ed with toxic epidennal necrolysis one aRer another in our department．The