山羊早期胚胎性别鉴定及玻璃化冷冻保存的研究-动物营养与饲料科学专业论文.docx

P___●__________●____●______-__●-_●_●__-。。。。。’。’。。1。。。。。。。。1’。。。。。。。。。。。。。。’。’。。。。。。。。。。。。。。。。。’—1。。—’。。。—1。。。’。。。。。’。。。。。’’。’1。。。—’。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1。。。。。。。。。。。。。’。’。。。。。。’—————————————————一————————————————。’。’—’——Sex P___●__________●____●______-__●-_●_●__-。。。。。’。’。。1。。。。。。。。1’。。。。。。。。。。。。。。’。’。。。。。。。。。。。。。。。。。’—1。。—’。。。—1。。。’。。。。。’。。。。。’’。’1。。。—’。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。1。。。。。。。。。。。。。’。’。。。。。。’—————————————————一————————————————。’。’—’—— Sex Identification and Vitrification for Goat Early Biopsied Embryos A Dissertation for Master’S Degree Submitted to the Faculty of Graduate School of Zhej iang University Director：Researcher．Yu Song-dong Submitted time：May,2006 Hangzhou，Zhejiang 浙江大学硕士学位论文目 浙江大学硕士学位论文 目 录 主要英文缩写词 1 摘 要 ．2 Abstract ．． ． 3 前言 第一部分文献综述 第一章晡乳动物胚胎性别鉴定的最新研究进展 ．．． 8 1胚胎性别鉴定的理论基础 。 1．1性别决定的发育学机制 8 1．2性别决定的遗传学机制 8 1．3 SRY基因与性别决定 ．．10 2胚胎性别鉴定的方法 ．．． ．12 2．1染色体核型分析 。12 2．2胚胎的细胞毒性分析 ．13 2．3囊胚形成抑制法 ．13 2．4间接免疫荧光法 ．．13 2．5核酸探针法 ．．14 2．6聚合酶链式反应(PCR) 14 3展望 ．16 第二章哺乳动物胚胎冷冻保存的最新研究进展 17 1冷冻保存的生物学机理 ．．． 17 2抗冷冻保护剂和冷冻液 18 3胚胎冷冻保存的方法 ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．．．．19 3．1常规(慢速)冷冻保存 ．．19 3．2快速冷冻保存 。19 3．3玻璃化冷冻保存 。20 3．4山羊胚胎的冷冻保存 ．21 浙江大学硕士学位论文4存在问题及展望 浙江大学硕士学位论文 4存在问题及展望 22 第二部分试验研究 第三章非电泳PCR法鉴定山羊早期胚胎性别以及对切割取样后胚胎的修复试验 ．24 l材料与方法 ．．24 1．1材料 ．24 1．2试验方法 24 1．3数据处理与统计 ．28 2试验结果 ．28 2．1胚胎取样结果 ．．28 2．2胚胎性别鉴定 ．29 2．3胚胎修复结果 ．．29 3讨论 。30 第四章PCR扩增ZFX／ZFY对羊早期胚胎的性别鉴定 32 l材料与方法 ．．32 1．1材料 ．32 1．2试验方法 。32 2 l吉果 。33 2．1血液样品性别鉴定试验结果 ．．33 2．2胚胎性别鉴定 ．．33 3讨论 ．．34 第五章山羊早期性别胚胎玻璃化冷冻保存研究 。36 ∥ l材料与方法 36 l-l材料 36 1．2方法 ．．36 2实验结果 。39 2．1各种冷冻保护剂的毒性试验 ．： 39 2．2玻璃化溶液介质测试结果 ．．40 2．3玻璃化液毒性比较 ．40 II 浙江大学硕士学位论文2．4冷冻方法的优化结果 浙江大学硕士学位论文 2．4冷冻方法的优化结果 42 2．5山羊性别冷冻胚胎的囊胚发育率及产羔率 43 3讨论 ．44 ，J、结 ．．47 创期f．点 ．48 参考文献 49 附录 ． 附录I版图及说明 。56 附录Ⅱ器材及溶液的配制 59 致谢 60 III 浙江大学硕士学位论文主要英文缩写词 浙江大学硕士学位论文 主要英文缩写词 英文缩写英文全称 中文名称 AMDF Anti．mullerianduct factors 抗缪勒氏管因子 AMH Anti．mullerian hormone 缪勒氏体抑制物 I BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 DMSO Dimethyl Sulphoxide 二甲基亚砜 D．PBS Dulbecco’S Phosphate Buffered Saline 杜氏磷酸盐缓冲溶液 EG Ethylene