硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究-卫生毒理学专业论文.docxVIP

硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究摘要 硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究 摘要 目的初步建立小鼠精原细胞体外分离、纯化及培养的实验方法，并探讨硫 酸镍对小鼠精原细胞的毒作用。 方法选择健康昆明种6～8天雄性小鼠，摘取睾丸组织，采用组合酶消化法 制备小鼠睾丸细胞悬液，Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞，贴壁培养进 一步纯化精原细胞，用碱性磷酸酶染色鉴定。分离纯化的精原细胞继续培养，至 生长状态良好时，用25、50、100、200、400、800 ll mol／L硫酸镍染毒，以染毒 后6h、12h、24h、36h为观察终点，用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测镍对小鼠 精原细胞的毒作用；采用透射电镜观察硫酸镍染毒后精原细胞超微结构的变化。 结果用组合酶消化和Percoll不连续密度梯度法，分离6-8dd、鼠的精原细 胞，可以获得纯度较高、基本满足体外实验要求的精原细胞；M1vr结果显示，随 着染毒浓度的增加和染毒时间的延长，100弘mol／I镍染毒6h细胞生长抑制(／2 0．05)，在6h、12h、24h、36h都存在剂量一效应，在25、50、100、200、400、800 II mol／L的浓度下都存在时间一效应关系，其染毒24tJ,时IC50为487]比mol／L，染毒 35t]、时IC50为423肛mol／L。随着染毒浓度的增加和染毒时间的延长，100弘m