第六章 食品添加剂分析.pptVIP

2 加工水产品 c) 提取 称取5.00g已捣碎样品于100mL离心管中，加入200μL混合内标标准溶液，依次加入1mL盐酸羟胺、2mL 对-甲苯磺酸、2mL 乙酸铵缓冲溶液和40mL乙腈，匀浆2min(10000r/min)，离心3min(3000r/min)，将上清液转移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入30ｍＬ二氯甲烷、35mL水，振摇2min，静置分层，收集下层有机层于150mL梨形瓶中，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷层，45℃旋转蒸发近干。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 d) 净化 将中性氧化铝柱串接在阳离子交换柱上方。6mL乙腈分三次（每次2mL），用旋涡震荡器涡旋溶解上述提取物，并依次过柱，控制阳离子交换柱流速不超过0.6mL/min，再用2mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后，弃去中性氧化铝柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液、3mL乙腈淋洗阳离子交换柱，弃去流出液。用4mL 5%（v/v）乙酸铵甲醇溶液 洗脱，洗脱流速为1mL/min，用10mL刻度试管收集洗脱液，用水定容至10.0mL，样液经0.2μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 液相色谱-串联质谱条件 a) 色谱柱：C18柱，50mm×2.1mm（i.d.），粒度3μm； b) 流动相：乙腈 + 5mmol/L乙酸铵 = 75+25(v/v)； c) 流速：0.2mL/min； d) 柱温：35℃； e) 进样量：10μL； f) 离子源：电喷雾ESI，正离子； g) 扫描方式：多反应监测MRM； h) 雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求； i) 喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度； j) 监测离子对：孔雀石绿m/z 329/313（定量离子）、329/208；隐色孔雀石绿m/z 331/316（定量离子）、331/239; 结晶紫m/z 372/356（定量离子）、372/251；隐色结晶紫m/z 374/359（定量离子）、374/238；氘代孔雀石绿 m/z 334/318（定量离子）; 氘代隐色孔雀石绿 m/z 337/322（定量离子）。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 液相色谱-串联质谱测定 按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量，孔雀石绿和结晶紫以氘代孔雀石绿为内标物计算，隐色孔雀石绿和隐色结晶紫以氘代隐色孔雀石绿为内标物计算。 在上述色谱条件下孔雀石绿、氘代孔雀石绿、结晶紫、氘代隐色孔雀石绿、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的参考保留时间分别为2.27min、2.30min、2.88min、5.21min、5.31min、5.61min。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石绿标准的离子流图 * 感谢你的观看 2109年5月18日 液相色谱-串联质谱确证 按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，分别计算样品和标准工作溶液中非定量离子对与定量离子对色谱峰面积的比值，仅当两者数值的相对偏差小于25%时方可确定两者为同一物质。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 高效液相色谱法 原理 试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层并浓缩，经酸性氧化铝柱净化后，高效液相色谱-PbO2柱后衍生测定，外标法定量。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 样品制备 1. 提取 称取5.00 g样品于50 mL离心管内，加入1.5 mL 20%的盐酸羟胺溶液、2.5 mL 1.0 mol/L的对-甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙酸盐缓冲溶液，用匀浆机以10 000 r/min的速度均质30 s，加入10 mL乙腈剧烈震摇30 s。加入5g酸性氧化铝，再次震荡30 s。 3 000 r/min离心10 min。把上清液转移至装有10 mL 水和2 mL 二甘醇的100 mL离心管中。然后在50 mL离心管中加入10 mL乙腈，重复上述操作，合并乙腈层。 * 感谢你的观看 2109年5月18日 2. 净化 在离心管中加入15 mL 二氯甲烷,振荡10 s， 3 000 r/min离心10 min， 将二氯甲烷层转移至100 mL的梨形瓶中，再用5 mL乙腈、10 mL 二氯甲烷重复上述操作一次，合并二氯甲烷层于100 mL梨形瓶中。45℃旋转蒸发至约1 mL，用2.5 mL乙腈溶解残渣。 将酸性氧化铝柱安装在固相萃取装置上，将梨形瓶中的溶