糖的提取分离、结构测定.pptVIP

三、单糖的鉴定 一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，经显色后用薄层扫描法求得各种糖的分子比。 用GC或HPLC对单糖定性定量，GC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作为对照品。 NMR谱，也可以有效地鉴定苷分子中糖的种类。 四、糖的连接位置的测定 1.甲基化法： 将被测物全甲基化，水解苷键，用GC定性定量分析，具有游离羟基的部位是糖的连接位点。 2. 1H-NMR 法： 根据乙酰化后的质子化学位移判断糖的连接位点。 3. 13C-NMR法： 通过苷化位移，推断糖的连接位点。 五、糖链连接顺序的确定 1.部分水解法： 将糖链水解成较小片段（低聚糖），然后分析片段推断糖链的结构。 2.质谱法 根据质谱中的裂解规律和裂解碎片推测糖链的连接顺序。 3.NMR和2D-NMR法。 2. 质谱法 FDMS、FABMS等。 优点：不必制备衍生物,用量小,准确,简便。 是将糖及其苷类衍生物全乙酰化后，测定观察两糖之间质子的远程偶合或NOE效应，确定糖的连接顺序。 3. NMR和2D-NMR法。 通过HMBC可确定糖的连接位点。 六、苷键构型及氧环的确定 1.苷键构型确定方法包括： 1H-NMR 法、酶解法、分子旋光差法等。 1H-NMR 法 1 利用端基质子的偶合常数 2 利用α-苷键和β-苷键的端基碳的化学位移差别 3 利用2D-NMR谱 酶解法 如麦芽糖酶一般能水解的为α-苷键，能被苦杏仁苷酶水解的大多为β-苷键 2.氧环测定包括： 13C-NMR法、甲醇解法、Smith降解法等。 通常呋喃糖C3和C5位的化学位移明显偏大，多数 大于80 复习题 糖的核磁共振性质 糖链的结构测定 第五节 糖及苷的提取分离 一、提取 单糖、低聚糖及苷类化合物 常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得到不同极性的化合物。 多糖 常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。 植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制酶的活性。 提取流程 二、分离 1.季铵盐沉淀法 与酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分离。 常用季氨盐有十六烷基三甲胺溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。 提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可沉淀分离中性多糖。 2.分级沉淀或分级溶解法 按比例由小到大的顺序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，反复溶解与沉淀。 为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性多糖在PH2-4时进行。 分级沉淀法得到的多糖，常含有较多的蛋白质，需将其去除 方法： 选择使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂（如酚、三氯醋酸、鞣质等）处理 sevag法：（用氯仿:丁醇 5:1混合） 酶解法：（蛋白水解酶，常与sevag法合用） 三氟三氯乙烷法 三氯醋酸法 蛋白质的去除 3.离子交换色谱 常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。 阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。 中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤维素吸附 酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比小的吸附力强，直链分子比支链分子易吸附。 4.凝胶柱色谱 分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。 常用葡聚糖凝胶（sephadex G） 5.纤维素柱色谱（吸附＋分配） 6.制备性区域电泳 （分子大小、形状、电荷不同，在电场作用下 的迁移速率不同） 第六节 糖的核磁共振性质 一、糖的1H-NMR 性质 1. 1H-NMR化学位移 糖的端基质子信号在δ4.3~6.0 甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右 糖上其余质子信号在δ3.2~4.2之间。 2.化学位移的应用 根据糖的端基质子信号的个数和化学位移值 可推测连有糖的个数、糖的种类。 根据甲基质子信号的个数和化学位移值 可推测甲基五碳糖的个数、糖的种类。 3.偶合常数 质子的邻位偶合常数与二面角有关 两面角90度 J=0Hz； 两面角0或180度 J=6~8Hz； 两面角60度 J=2~4Hz 当2-H为直立键时 β-D-和α-L-型糖的 1-H和2-H键为双直立键，φ=180，J=6~8Hz α-D-和β-L-型糖 1-H为e键，2-H为a键，φ=60，J=2~4Hz 如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿洛糖的2-H均为直立键 当其成α苷时，端基质子与2-H的J约为4Hz； 当其成β