轮状病毒VP7基因表达载体的构建及其向胡萝卜中的转化研究-农产品加工及贮藏工程专业论文.docxVIP

摘 摘 要 本实验娃轮状病毒的VP7为疆豹基嚣，构建了VP7基因豹表达载俸和VPT-CTB融 台表达载体；黻胡萝卜为受体材料，建立并优化了胡萝}的转化体系，获褥了蘸暖常转 泶V_P7基因的转基因胡萝h植株。 ， (设诗具有Ndel羁SacI零羧裁蛙酶甥缀点黎v玎蒸羧专l耪，逶避PCR扩壤爨VF7 嫠因并经测序验证。莉用Ⅵ哼基因和质救pBll21上楣间的单克隆使点。将VP7熬因定 向克隆到植物潦达载体pBll21上，构建了pBll21VP7袭达载体。在pBll21VP7袭达载 髂残凌鞠建豹蒸秘主，嚣搦矮毽pBll21VF7窝矮粒pUCl9CTB主瓣瓣熬NdeI霾XbaI 单融制性酶切位点，构建了pmmcmve7融合表达载体。PcR和黻错I!E内切酶鉴定 懑组质粒与实际相符。并将麓组表达质糙导入根癌农枰蒲LBA4404巾，获得转慕因工 、／ 疆麓。夕一 以胡萝卜蹦种。改良黑咀”为受体材料，以胡萝卜幼苗的下胚袖为外植体，建藏了 农杆菌介导法的胡萝b转化体系，并对其巾的种子消毒、激素水平、外植体的茁龄、选 嚣蓬、共壤葬瓣游等关键步鞭豹条箨避弦了臻诧。络暴轰绣：②秘予羽最甓摹蘩慕挣秀 t％AgN03浸泡15rain；⑦2，4-D对愈伤组织形成肖殿蓍的促进作用，其最佳浓度为 O．1mg／L，而KT对胡萝卜愈伤组织的分化影响不明显；③种子发芽髓6～7天的幼菌下 簸疆最逶子露为转纯懿努壤髂；《巍