胶体金试纸条的制备.ppt

免疫胶体金技术简介;目录;;胶体金技术的发展;胶体金技术的种类及优点; ;免疫胶体金技术的特点; 最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。 ;胶体金的合成;胶体金合成;胶体金粒径（nm）;注意事项（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。（2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。 ;胶体金的质量鉴定;双电层结构保证了胶体金的稳定性，使金颗粒始终以悬浮状态存在。 胶体金溶液通常由呈单一分散状态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液则要求金颗粒维持在某一固定直径不变。;金标样本程序;胶体金调整正确的pH值;常见蛋白标记条件;最小蛋白用量的确定;（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。;发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而 4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4号管的蛋白量。;最终结合（McAb）;纯化;胶体金免疫层析法试剂的组成;样品垫(Sample pad)： 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。 样品垫的作用： 减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布； 去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。;结合垫(Conjugate pad)： 玻璃纤维、聚酯膜、???维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。 结合垫的作用主要为： 　 　-　吸附一定量的金标结合物颗粒； 　　-　吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； 　　-　保持金标结合物颗粒的稳定性； 　　-　保证金标结合物颗粒定量完全释放等。 ;硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)： 一般使用Millipore，MDI，SS，whatman 等国外公司的硝酸纤维素膜。 NC膜的作用： ? ?? - 在检测线和对照线条带区域固定抗体； 　　-　样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应； 　　-　反应在NC膜上显色，读检测结果 NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。;硝酸纤维膜的选择;片材： 不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。;胶体金免疫层析试纸模式;双抗体夹心模式;竞争模式;SPA/G蛋白模式;胶体金免疫层析试纸质量检测;胶体金免疫层析试纸的应用;上海金标生物生物科技有限公司;XYZ三维划膜喷金仪;谢谢！