实验一二-重组质粒DNA提取、双酶切鉴定、凝胶电泳、紫外分光法.pptVIP

质粒DNA的提取、纯化、酶切、电泳、 紫外分光光度法定量测定 朱文博 中山医学院 基因工程 定义： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为重组DNA技术，又称重组DNA技术。 2 提取大肠杆菌质粒DNA的方法和原则 2.3 核酸分离纯化的总原则： (1) 保证核酸一级结构完整 (2) 排除其他分子的污染（蛋白质、脂类、 糖、 有机溶剂、金属离子、其他DNA、RNA等） 1.1 影响DNA在凝胶中迁移速率的因素 1 DNA分子的大小 2 构象 3 凝胶浓度 4 电压 5 缓冲液 产生误差的原因： 1.单色性不纯的影响； 2.杂散光的影响； 3.比色皿的影响； 4.温度、pH值的影响； 5.吸光度读数时的误差。 * 3 实验步骤 用0.1×TE 对待测DNA样品按1:20稀释 0.1×TE作为空对照,在波长260nm、280nm、310nm处分别测标准DNA样品的OD值 根据OD值计算DNA浓度（?g/ml） 单链DNA[ssDNA]=33×(OD260－OD310)×稀释倍数 双链DNA[dsDNA]=50×(OD260－OD310)×稀释倍数 4. DNA的纯度鉴定 OD260/ OD280=1.8 （RNA为2 .0） 1.8 可能有RNA污