动物细胞工程第四章细胞的基本培养.pptVIP

5、克隆培养技术 （1）稀释铺板法：使用稀释后的低密度细胞悬液，多孔培养板接种，每孔平均含1个细胞。 2)饲养层克隆法：饲养细胞常用：成纤维细胞、胸腺细胞、巨噬细胞等；较少应用。 3)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法 ：可帮助单个细胞和极低密度细胞贴壁繁殖存活。 4)琼脂克隆法：酸性硫酸多糖可促进恶性转化细胞生长；抑制正常细胞生长。 5)多孔塑料培养板单细胞克隆法：简单易行，成功率高。低密度细胞悬液（1--2个细胞/ml）--各孔分别接种0.5--1ml。 6．细胞同步化培养：在一般培养条件下，群体中的细胞处于不同的细胞周期时相之中。为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，常需采取一些方法使细胞处于细胞周期的同一时相，这就是细胞同步化技术。 选用DNA合成抑制剂可逆地抑制S期细胞DNA合成而不影响其他细胞周期运转，最终可将细胞群体阻断在G1／S期交界处； 一些抑制微管聚合的药物，因抑制有丝分裂装置的形成和功能行使，可将细胞阻断在有丝分裂中期，即使细胞同步于M期。 A：M期同步化方法 a．振荡收集法 该法利用M期细胞变圆易脱落的特点，将贴壁细胞按一定的时间间隔振荡，使M期细胞脱落，离心沉淀后即获得M期细胞。 b．秋水仙胺阻抑法 将细胞传代培养至指数生长期；加入秋水仙胺，使最终浓度为0