微生物学检验(第3版)分枝杆菌属与诺卡菌属.ppt

分枝杆菌属和诺卡菌属 学习要求 熟练掌握结构分枝杆菌的生物学特性、微生物学检验和临床意义。 熟悉麻风分枝杆菌生物学特性、微生物学检验和临床意义。 熟悉诺卡菌属的生物学特性、微生物学检验。 第一节 分枝杆菌属 分枝杆菌属是一类细长、略带弯曲、呈分枝状生长的杆菌。 本菌属的主要特点是细胞壁含有大量的脂类，这与染色性、抵抗力、致病性有密切相关。 因其具有抗酸性，一旦着色后能抵抗盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。 主要包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌 一、结核分枝杆菌 （一）生物学特性 （二）微生物学检验 （三）临床意义 （一）生物学特性 典型形态是直或弯曲、两端钝圆、菌体细长，单个散在或呈分枝状排列，菌体常扭集在一起呈绳索状、束状或堆积成团。 无芽胞，无鞭毛、无荚膜 革兰染色阳性，但不易着色。 萋-尼氏抗酸染色后呈红色。 2、培养特性 专性需氧 生长缓慢:15-20h 繁殖一代 生长适宜温度35-37℃，PH 5.5-7.2，营养要求较高。 在改良罗氏培养基上的菌落：粗糙、凸起、厚，呈颗粒、结节或菜花样，边缘薄且不规则、乳白色或淡黄色，无可溶性色素。 结核杆菌菌落 3、生化反应 不发酵糖类 触酶（+） 硝酸盐还原试验（+） 耐热触酶、耐热磷酸酶试验阴性，加热68℃后丧失活性 4、抵抗力 耐干燥：干燥痰内可存活6-8个月，黏附在尘埃能保持传染性8-10天 对湿热和紫外线敏感 对酸、碱有较强的抵抗力 对75%乙醇敏感 （二）微生物学检验 1、标本 2、显微镜检查 3、分离培养 1、标本 痰 容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本 采集方法：即时痰、晨痰、夜间痰 痰的性状：合格的痰标本应是患者深呼吸后由肺部深处咳出的分泌物，如干酪痰、血痰、黏液痰 其它标本 （2）废弃标本和污染物的处理 痰盒和废弃标本等污染物 高压蒸汽灭菌后才能按《医疗废物管理条例》丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理 痰检工作面的消毒 高压蒸汽灭菌 消毒液擦拭 紫外线灭菌灯 2、显微镜检 抗酸染色镜检 涂片 染色 镜检 报告 涂片抗酸染色检查方法-5 Z－N染色步骤  镜检读片  结果分级报告标准： 抗酸杆菌阴性 (－)： 连续观察300个不同视野， 未发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数： 1-8条抗酸杆菌/300视野。 抗酸杆菌阳性（1＋）: 3-9条抗酸杆菌/100视野。 抗酸杆菌阳性（2＋）：1-9条抗酸杆菌/10视野。 抗酸杆菌阳性（3＋）：1-9条抗酸杆菌/每视野。 抗酸杆菌阳性（4＋）：≥10条抗酸杆菌/每视野。 3、分离培养 改良罗氏培养基培养法 标本前处理 去污染、液化标本 接种、培养与观察 每份标本同时接种两支 结果 3天内有菌落——报告非分枝杆菌生长 7天内有菌落，并经抗酸染色确认——非结核分枝杆菌 7天以后有菌落，并经抗酸染色确认——分枝杆菌 8周内仍无菌落——培养阴性 （三）临床意义 致病物质 所致疾病及临床表现 免疫性与超敏反应 结核菌素试验 1、致病物质 不产生内毒素、外毒素，无荚膜、无侵袭性酶 主要是机体对菌体成份及代谢产物引起免疫损伤及超敏反应 蛋白质 是结合菌素的主要成分，和蜡质D结合后能使机体发生超敏反应。 脂质 索状因子：与索状生长现象有关、抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿、 磷脂：与结核结节的形成及干酪样坏死有关 硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，使细菌能在吞噬细胞中长期存活。 蜡质D：迟发型超敏反应 2、所致疾病及临床表现 可通过呼吸道、消化道、皮肤黏膜损伤等多种途径感染 全身各器官组织皆可受染，以肺结核最为常见。 继发感染亦称复活感染，发痊愈的原发感染可以复活，成为活动性结核病。继发性感染亦可由外界新入侵的结核分枝杆菌引起，其特征是慢性肉芽肿炎症，形成结核结节、干酪化和纤维化。 3、免疫性与超敏反应 结核的免疫属于感染免疫，又称有菌免疫。即此种免疫力随结核分枝杆菌或其成分在体内存在而存在。 属胞内感染菌，其免疫主要是以 T 细胞为主的细胞免疫。 迟发型超敏反应 4、结核菌素试验 是应用结核菌素来测定机体能否引起皮肤迟发性超敏反应的一种试验。 旧结核菌素（old tuberculin，OT) 纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) 结核菌素试验 原理：迟发型超敏反应的机制 方法 PPD 5个单位两前臂皮内注射 48～72h后，红肿硬结≥5mm者为阳性，≥15mm为强阳性，＜5mm为阴性 结果分析： 阳性：感染过TB或接种卡介苗成功 强阳性：活动性结核病 阴性：未感染过、未接种卡介苗、细胞免疫力功能