磷酸苏氨酸裂解酶SpvC的晶体结构与功能研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国协和医科大学硕I二学位论文 中国协和医科大学硕I二学位论文 导师：柴继杰研究员 作者：陈琳沽 摘 要 在动物与植物的固有免疫反应中，进化保守的MAP融起着重要的作用。而病 原菌通常采取的策略就是干扰MAPK信号通路来逃避宿主的免疫反应。 最近的研究表明，在动物与植物病原菌中高度保守的SpvC蛋白属于一类新颖 的酶家族——磷酸苏氨酸裂解酶，它可以不可逆的使MAPKs失活从而抑制宿主免 疫。与蛋白磷酸酶不同的是，磷酸苏氨酸裂解酶可以识别活化的MAPKs中的 pThr-X-pryr模体的pThr，通过切割C．0P键而不是O-P键来使之永久失活。虽然 磷酸苏氨酸裂解酶对pThr-X-pTyr模体中的pTyr并没有活性，但是它更喜欢这种双 磷酸化形式而不是单磷酸化形式。用pSer取代pThr-X-pTyr模体中的pThr既破坏 了酶对底物的识别又降低了酶的催化效率，表明磷酸苏氨酸裂解酶更倾向于对pThr 的磷酸基团的消除而不是对pSer。 为了研究这个酶家族的催化反应机制，我们解析了SpvC的晶体结构，发现其 是一种新颖的由单一邮紧密结合的结构域组成的折叠方式。 SpvC的核心由七个 反向平行的p折叠片和八个a螺旋组成。SpvC表面有一个明显的浅凹槽，是由L1、 L2、L3环及五个B片盘绕在一起组成的，可能是底物结合的位点。由SpvC酶家 族的保守残基组成的两个相邻的碱性表面，可能对双磷酸底物中的磷酸基团的识别很 重要，这一点已经被进一步的点突变实验证实。保守的K136残基可能作为催化残 基参与消除反应。这些结果不仅为这个酶家族所具有的独特的催化反应机制提供了一 些启示，同时也为我们设计小分子治疗药物提供了一条新的思路。 羞丝逦SpvC，MAPKs，HopAll酶家族，磷酸苏氨酸裂解酶 论文题目：磷酸苏氨酸裂解酶spvc的晶体结构和功能研究 第3页共66页 AbstractMAPKs Abstract MAPKs are evolutionarily conserved and play vital roles in both animal and plant innate immtme responses．Therefore one of the common strategies used by pathogenic bacteria is to interfere with MAPK signaling to evade host immune defenses． Recent studies indicate that,SpvC，conservad in both animal and plant pathogenic bacteria,belongs to a novel family of enzymes designated phosphothreonine lyase that irreversibly inactivate mitogen-activated protein kinases(MAPKs)to repress host innate immunity．In contrast with protein phosphatases，phosphothreonine lyase recognizes the phosphothreonine in pThr-Xaa-pTyr motif(Xaa stands for any residue)contained within the activated MAPKs and removes its phosphate moiety by cleaving the C—OP mther than the 0一P bond,thus permanently inactivating them．Although phosphothreonine lyases do not exhibit activity toward phosphotyrosine in pThr-Xaa-pTyr motif,they do favor the biphosphorylated form over the monophosphorylated form． Substitution of phosphothreonine in pThr-Xaa-pTyr motif with phosphoserine compromises both peptide substrate recognition and catalytic efficiency of OspF,indicating that phosphothreonine lyase displays a preference f