梨的离体培养与叶片不定梢诱导研究-森林培育专业论文.docxVIP

摘要建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此，本研究 摘要 建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此，本研究 分别以‘巴梨’(助US communis L．CV．Bartlett)、‘考密斯’(P．communis L．CV．Cornice) 和‘早酥’(P．bretschneideri Rehd．CV．Zaosu)、‘身不知’(P．pyrifol／aNaki．CV．Shenbuzhi) 的茎尖为外植体，通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较，探讨了最佳增殖和生 根培养基配方及培养条件，并在此基础上着重研究了基因型、基本培养基、外源激素及 附加物对试管苗叶片不定梢再生的影响。其试验结果表明： (1)继代增殖试验中通过增殖倍数、平均株分化芽数、平均株展叶数分析表明四个 品种的最佳增殖培养基均为MS+BAl．0mg／L+IBA0．1mg,L，但当采用平均株鲜重及平均 株干重来考察时，品种间差异极显著。 (2)通过考察不定梢再生率、平均每叶梢数以及不定梢再生力三个指标，四个品种 的最合适的不定梢诱导培养基和再生率分别是： ‘巴梨’： MS+TDZ0．5mg／L+IBA0．1meJL，不定梢诱导率达62．8％。 ‘考密斯’：MS+TDZ3．0mg／L+IBA0．1mg／L，不定梢诱导率达55．6％。 ‘早酥’： NN69+TDZl．0mg／L+NAA0．4mg／L，不定梢再生率为75．O％。 ‘身不知’：NN69+TDZl．O～1．5mg／L+NAA0．1mg／L，不定梢再生率为62．6～71．4％。 (3)0．1～0．5mg／L、0．1～2．0mg／L、0．1～4．Omg／L和0．1～0．5mg／L的AgN03分 别对‘巴梨’、‘考密斯’、‘早酥’和‘身不知’叶片再生有促进作用，AgN03浓度为0．1mg／L 时，可显著提高‘考密斯’、‘早酥’、‘身不知’叶片不定梢的再生频率。 (4)NH4+-N／N03-N为0：l～1：7时，‘身不知’、‘早酥’的不定梢再生率及再生力都 呈上升趋势，其中以1：7时的上升幅度最大。但NI-14+-N／N03-N为0：1时，没有不定梢 发生。 (5)结合生根率、平均根数、平均根长、平均株根鲜重及平均株根干重全面分析， 四个品种的最佳生根条件分别是： ‘巴梨’：在1／4MS+IBAl．Omg／L+蔗糖15．OeCL上光培养10天后转入l／4Ms+IBA 1．Omg／L+蔗糖15．09／L+ACl．og／L； ‘考密斯’：在1／2MS+IBA5．Omg／L+蔗糖15．09／L上光培养10天后转入1／2MS+ IBA5．0m班+蔗糖15．09／L+ACl．09／L『； ‘早酥’： ‘早酥’： 在MS+IBA2．5mg／L+蔗糖15．O∥L上暗培养10天后转入MS+蔗糖 1 5．OgfL+ACO．59／L； ‘身不知’：在I／4MS+IBA2．5mg／L+蔗糖5．O叽上暗培养10天后转入1／4MS+蔗糖 5．09／L+AC0．59／L。 关键词：梨(Pyr螂sp．)；离体培养；不定梢再生：形态发生 1前言在植物分类学上，梨属于蔷薇科(Rosaceae)、梨亚科(Pomoideae)、梨属(Pus) 1前言 在植物分类学上，梨属于蔷薇科(Rosaceae)、梨亚科(Pomoideae)、梨属(Pus) 植物“1。按目前的分类，现世界梨属植物共有30余种，我国14种”1。它可分为东方梨 系和西方梨系，东方梨起源于我国，所以又叫中国梨；西方梨原产于欧、亚。1。梨果不 仅形美色艳、肉质细软或酥脆，汁液丰润、香甜爽口，具较高的营养价值，而且还有很 高的医疗价值，其性寒味甘，具清热润肺、止咳祛痰之功效“1。梨作为一种重要的木本 经济果树，近年来发展很快，据世界粮农组织(FAO)资料统计，截止到2000年，我 国梨树面积为95．4万公顷，产量86．2亿吨，分别占世界梨栽培面积和总产量的52．3％ 和61．3％，均居世界首位。在我国水果产量中，仅次于苹果、柑橘，居第三位。1。 目前，我国梨果生产正朝着良种化、基地化、密植矮化、优质化等方向发展，但在 生产中仍存在着许多亟待解决的问题，如病虫害的控制、果实品质的提高等。这些问题 可通过生产管理，更多的是靠培育新品种途径来解决。传统的梨育种方法周期长、工作 量大。随着植物组织培养和基因工程技术的不断进步，利用生物技术进行育种已成为可 能。如通过细胞培养可筛选抗寒、抗病和抗盐碱的细胞突变体，进而获得既具有母体优 良性状又能特异表达新基因性状的植株；通过基因工程技术可有目的的改变单个性状， 而不影响其它优良性状”1，这两种技术的发展和成熟有可能极大地推动梨树育种工作的 进程。 2文献综述 2．1梨组织培养研究 植物生物技术是当今世