利用RAPD技术和ITS-2序列研究11种天牛的亲缘关系-森林保护专业论文.docxVIP

摘要本文探索了几种可以快速、简便地从天牛干标本、液浸标本和新鲜标本中提取DNA 摘要 本文探索了几种可以快速、简便地从天牛干标本、液浸标本和新鲜标本中提取DNA 模板的方法，得到了3种针对不同类型标本的具体提取方法，对所获得的基因组DNA进 行PcR扩增分析表明，这些提取方法切实可行。利用RAID和ITS一2分子标记技术，对 11种天牛进行研究，研究结果表明： 1．一般来说，鞘翅目昆虫与其它昆虫的不同之处就是体壁非常坚硬，透气透水性 差，在同等条件下，较其他昆虫阴干的时间要长，阴干时间越长对DNA的质量越不利。 为保证DNA质量最好烘干或者冰冻。长时间保存的干标本，基因组DNA降解严重并且存 在影响PCR扩增的因素。从干标本中提取基因组DNA的非常关键的处理措施，是在STE 缓冲液中浸渍干标本24小时，然后用去离子水冲洗3次，此方法大大减少了基因组DNA 的机械断裂，有利于保护千标本基因组ONA，减轻或排除对PCR扩增反应的影响。 2．从本次实验的RAPD-PCR扩增图谱中可看出，经过PCR之后的DNA能呈现明显的 多态性。实验结果证明，同种天牛用同一引物扩增幼虫和成虫所获得的结果相问，这为 更多近缘种的DNA多态性研究及重要种的鉴定提供了可能。 3．利用16个随机引物对11种天牛的亲缘关系进行了RAPD分析，共检测到157 个位点，多态位点百分率在5．10％～12．10％之间，多态位点百分率最高的是青杨脊虎天 牛(置rusticus)，．最低的是双条杉天牛(S．bifasciatu$)，利用RAPD分子标记构建了11 种天牛的遗传关系聚类图。 4．经测序得到的9种天牛的rrS．2序列已被Genbank所接收，利用rDNA的ITS．2 序列对9种天牛的亲缘关系进一步进行分析，其ITS．2序列长度为324～381bp，把测出 的9种天牛1TS．2全部序列作为一个共同数据距阵进行分析，构建了这9个种的系统发 育树。 美键词天牛：基因组DNA提取；RAPD；ITS-2；亲缘关系 ：==：==：一：：一：：：：：至些些些查兰堡圭：!!兰鳖=：：：：：：：：：：：=：!：：：=：Abstract ：==：==：一：：一：：：：：至些些些查兰堡圭：!!兰鳖=：：：：：：：：：：：=：!：：：=： Abstract This thesis has explored several kinds of methods for extract DNA template rapidly and conveniently from dry,liquid-dipped or fresh specimens of longicom beetles，SO the most efficient methods were gotten for 3 kinds of specimens under different environment respectively．The results of PCR analysis to the genome DNA that has already got indicated these extraction methods were feasible．Carry on research to 1 1 kinds of longicom beetles by two molecular marking techniques(gAPD，ITS-2)．The results： 1．In general，the difference of Coleoptera insects from others is that the body wall is very hard，gas and water permeability is bad．Under the same conditions the time for drying is longer and the DNA quality WOrse than other kinds．In order to get the higll quality DNA longicorn beetles had better be dried or icy．The genomic DNA of the museum specimens kept for a long time degradated very seriously and had the factors for influencing PCR．The primary treatment of extractingthe genomie DNA from museum specimens is that the specimens