薄层色谱法测定操作规程.docVIP

薄层色谱法测定操作规程 1.目的：建立一个薄层色谱法检查方法。 2.范围：适用于需用薄层色谱法检测的样品。 3.责任：质检科化学分析检验员对实施本规程负责。 4.程序 本法系指将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查。 4.1仪器与材料 4.1.1薄层板 4.1.1.1自制薄层板 4.1.1.1.1除另有规定外，玻板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求粒径为5～40μm。 4.1.1.1.2薄层涂布，一般可分为无黏合剂和含黏合剂两种。前者系将固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用10%～15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%～0.5% 4.1.1.2市售薄层板 分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。 4.1.2点样器 常用具支架的微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确、集中。 4.1.3展开容器 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光 滑，或有双槽。 4.1.4显色剂 见各品种项下的规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸气中显色，用以检出斑点。 4.1.5显色装置 喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。 4.1.6检视装置 为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应滤片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱用，暗箱内光源应有足够的光照度。 4.2操作方法 4.2.1薄层板制备 4.2.1.1自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm）取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30 4.2.1.2市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30 放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃ 4.2.2点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为 1.0～2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 4.2.3展开 4.2.3.1展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴两条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，使系统平衡或按各品种项 下的规定操作。 4.2.3.2将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至规定距离（一般为10～15cm）取出薄层板，晾干，按各品种项下规定检测。 4.2.3.3展开可疑单向展开，即向一个方向进行；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待占课机完全挥发后，将薄层板转动900，再用原转开机或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。 4.2.4显色与检视 荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻板，检视。 4.3系统适用性试验 按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，使斑点的检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效能符合规定。 4.3.1检测灵敏度 系指杂质检查时，采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清 晰的斑点。 4.3.2比移值（Rf） 系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的 距离的比值。 Rf ＝ 从基线至展开斑点中心的距离 从基线至展开剂前沿的距离 可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。 4.3.3分离效能 鉴别时，在对照品与结构相似药物的对照品制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时，在杂质对照品用供试品自身稀释对照溶液或同品种对照品溶液溶解制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点，或待测成分与相邻的杂质斑点应清晰分离。