离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定-果树学专业论文.docxVIP

华中农业大学硕士学位论文 缩赂词表 缩略符号 英文 中文含义 AFLP BA Amplified Fragment Length PolymoIF ism 6-Be皿yladenine 扩增片段长度多态性 6-韦基腺嘿岭 CH Casein hydrolysate 酸水解酷蛋白 ω1 colchicine 秋水仙素 CfAB Cetyltrimethylammonium bromid 十六烧基工甲基澳化肢 DAPI 4，6-diamidino-2.phenylindole 4，6-二联眯-2-口 I睐苯 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二肢囚乙酸 认A mA lndole-3-acetic acid 3-indole butytic acid 月|噪乙酸 月|噪丁酸 KT Kinetin 激动素 ME Malt extract 麦芽提取物 MT Murashige and Tucker MT 基本培养基 NAA ory a-Naphthyalene acetic acid oryza1in 荼乙酸 氨躏灵 Tris Tri (HydroxymethyD aminomethane 三经基氨基甲皖 1 离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定 离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定 离体加倍创造柑橘多倍体种质及其细胞学和分子鉴定 摘要 通过染色体加倍创造多倍体是开展倍性杂交获得柑橘无核新种质的一个重要 途径，也是柑橘育种主要目标之一。本研究用colchicine(简写c01)和oryzalin(简 写ory)处理柑橘原生质体和／或愈伤组织，主要结果如下： 1、用0．01％、O．05％、0．1％的colchicine和0．005％、0．01％、0．02％的oryzalin 处理宁波金柑(Fortunetla crass和lia cv．Meiwa)原生质体24 h，结果表明：随着浓度 的提高，原生质体活力降低，但oryzalin比colchicine的毒性低，前者处理的原生 质体活性较高；原生质体处理后活性最高的处理是0．005％ory和O．01％col，分别达 到90．51％和88．23％。用0．01％、O．05％、0．1％的col处理伏令夏橙(Citrus sinensis CV。Valencia)原生质体8 h后，原生质体活性急剧下降；当处理时间为8 h，浓度为 0．05％时，活力达到最高85．85％。 2、用0．01％、0．05％、0．1％的colchicine处理佛罗斯特fc．sinensis CV．Frost)脐 橙愈伤组织2 d、4 d、8 d，结果表明：在0．1％c01．4 d和O．1％c01．8 d处理中分别检 测到1个和5个四倍体胚状体，目前各获得1棵四倍体植株。此外，在0．1％c01．8 d 处理中检测到1个嵌合体胚状体。 3、用O．01％、0．05％、0．1％的colchicine分别处理宁波金柑原生质体8 h、16 h、 24h，其中0．05％c01．24 h处理的四倍体单细胞系诱导率最高(30．77％)，其次是0．1 ％c01．8 h和O．01％c01．24 h，诱导率分别为19．23％和17．71％。其中处理O．05％c01．24 h再生愈伤组织，处理0．1％c01．16h再生胚状体，而处理0．1％c01．8 h获得的愈伤组 织成功再生出芽。用0．005％、0．01％、O．02％的oryzalin处理宁波金柑原生质体24 h和48 h，未检测到四倍体胚状体。0．01％、0．05％、0．1％的colchicine处理伏令夏 橙原生质体2 h和4 h，结果只有处理0．01％col-4 h得到四倍体单细胞系，诱导率为 22．86％，四倍体愈伤组织再生胚状体，但未能再生成芽。 4、测定了宁波金柑、国庆1号(C Un娩iu‘GuoqingNo．1’)和伏令夏橙的二倍 体和四倍体细胞直径。三个品种的二倍体细胞直径分别为20．40_+2．47／zm、 21．53+_2．8和121、21．50_+3．27／zm：四倍体细胞直径分别为29．50_+2．6犁m、33．00_+3．15／_m、 29．75_+2．88埘n。 5、测定了宁波金柑、国庆1号和伏令夏橙二倍体和四倍体细胞周期。三个品 种的二倍体细胞分裂高峰分别出现在继代培养后第4 d、6 d、4 d，细胞分裂指数分 别为25．5±1．5％、25-3±0．6％、31．8+-1．0％；而四倍体细胞分裂高峰分别出现在继代 培养后第6 d、10 d、4 d细胞分裂指数分别为22．7±1．O％、21．2+1．2％、28．8±2．7％。 6、用24对AFLP引物