胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用.doc

胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用 食品,业斜枝 SdenceandTechnologyofFoodIndustry 胶体金免疫层析技术 0—0一 吴刚.姜瞻梅.霍贵成.田波 (东北农业大学乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030) 摘要:主要介绍免疫层析技术和胶体金标记技术的原理及其在 食品安全与质量控制方面的应用,并对其将来的发展方向 进行了探讨. 关t词:免疫层析,胶体金,检测 Abstract:Theprinciplesofimmunochromatographyandcolloidal goldmarkedtechnologyandtheirapplicationsinthe regionsoffoodsafetyandqualitycontrolwasmainly introduced.Andthedevelopmentdirectioninfuture wasdiscussed KeywOrds:immunochromatography;colloidalgold;detection 中图分类号:TS207-3文献标识码:A 文章编号:1002—0306(2007)12—0216—03 免疫层析(Immunochromatography,IC)技术是20 世纪80年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层 析技术相结合的快速免疫分析方法….其原理是以 条状纤维层析材料为固相,借助毛细作用使样品溶 液在层析条上泳动,同时,使样品中的待测物与层析 材料上针对待测物的受体(如抗体或抗原)发生高特 异,高亲和性的免疫反应,层析过程中免疫复合物被 富集或截留在层析材料的一定区域(检测带),通过 酶促显色反应或直接使用可目测的着色标记物(如 胶体金),短时间(5～10min内)便可得到直观的实验 结果.它不需进行结合标记物与游离标记物的分 离,省去了繁琐的加样,洗涤步骤.因而这种分析技 术操作简单快速,分析结果清楚,易于判断,且无须 仪器(或只需简单仪器),非常适用于食品的现场快 速检测. 1免疫层析类型 按照免疫层析中抗原与抗体结合方式的不同, 收稿El期:2007—02—05{通讯联系人 作者简介:吴刚(1984一),男,硕士研究生,研究方向:食品生物技术. 基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目;乳品科学 教育部重点实验室主任基金项目(KLDs20o6—0l53). 可将免疫层析分为两类:非竞争性免疫层析和竞争 性免疫层析. 1.1非竞争性免疫层析 即双抗体夹心法.将着色标记物(一般采用胶 体金)与待测抗原的特异性抗体(Ab1)相偶联,并将 其沉积在结合区上.当样品(尿,血浆,饮料等)加到 样品区后,由于毛细管作用,样品迅速浸透结合区, 带有标记物的Abl被溶解,并在上部材料吸水涨力 的牵引下随着样品溶液沿膜条向前移动.若样品中 存在待测抗原,它就会和带有标记物的Abl结合形 成Ag—Abl.随后,样品通过固相化有捕获抗体(一 般是待测抗原的另一表位特异性抗体Ab2)的检测 线(testline)区域时,Ag—Abl复合物被捕获,形成 Abl—Ag—Ab2复合物.一部分未与Abl结合的样品 继续前移,通过固相化有抗Abl抗体(Ab3)的质控 线(controlline)区域,形成Ab3一Abl复合物.这种 方式通常用于检测带有多个抗原位点的分析,常用 于致病细菌,大分子蛋白质等的检测等. 1.2竞争性免疫层析 将着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1) 相偶联,沉积在结合区.而检测区处固相化的是待 测抗原或待测抗原的类似物.若样品中含有待测抗 原,则样品中的抗原和带有标记物的Abl形成Ag— Abl复合物.随后在通过固相化有待测抗原或其类 似物的检测区时,由于竞争抑制,不再发生反应,检 测线处不显色;样品继续前移,Ag—Abl复合物被固 相化在质控线处的抗Abl抗体(Ab2)所结合,形成 Abl—Ag—Ab2复合物,使质控线显色.这种方式适 用于检测带有单一抗原表位的小分子抗原,常用于 农兽药残留,违禁药物的检测等. 2胶体金免疫层析技术 胶体金(colloidalgold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶液,是氯金酸在还原剂如白磷,柠檬酸三 钠等的作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于静 电作用成为一种稳定胶体溶液.由于胶体金颗粒具 有高电子密度的特性,且颗粒聚集达到一定密度时 综食品,II斜坟 (即达到10个/mm),出现肉眼可见的粉红色斑点, 因而可以作为免疫层析试验的指示物. 胶体金的制备是利用还原法剂还原氯金酸进行 制备,目前常用的还原剂有:白磷,乙醇,过氧化氢, 硼氢化钠,抗坏血酸,柠檬酸三钠,鞣酸等.最常用 的制备方法为柠檬酸三钠还原法