基因文库的建立课件.pptVIP

第四章?? ?? 基因文库的建立 ? 基因文库(gene library) 基因组文库(genomic library) cDNA文库(cDNA library) 第一节 基因组文库的构建 定义： 含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总和。 一. 基因组文库的规模 N—基因组文库克隆总数 P—所需机率 N= f—插入片段与基因组DNA长度之比 二．建立基因组文库的一般程序 1．载体DNA片段的制备 DNA分离纯化 限制酶切 脱磷酸化反应 2． 供体DNA片段的制备 总DNA分离纯化 机械剪切法 分离特定大小DNA片段 酶法 部分酶切 分离特定大小DNA片段 完全酶切 ln（1-P） ln（1-f） 3. 供体与载体DNA连接 要提高重组频率，应注意连接反应体系中的总DNA浓度和两种DNA