生物化学-12323245183资料文档.pptVIP

中心法则： 中心法则： 一、DNA的半保留复制 (2)冈崎片段的RNA引物 DNA复制时不仅需要四种dNTP前体，还需要一个与模板DNA碱基顺序互补的RNA短片（约10bp）段当作引物。 RNA引物的合成称引发，由引物体完成。引物体由引物合成酶和另外几种蛋白质共同组成。它可以沿模板链向分叉的方向前进，并断断续续地引发生成后随链的引物RNA短链 (3)DNA连接酶：连接DNA双链中的单链切口 与DNA合成有关的其它蛋白因子(大肠杆菌中) 真核细胞内有五种DNA聚合酶 核苷酸切除修复（2） （四）直接修复（1） 直接修复（2） 限制性内切酶 限制性内切酶 逆转录病毒的生活史 cDNA：反义DNA 几乎所有真核生物mRNA分子的3‘末端都有一段polyA,当加入寡聚dT作为引物时，mRNA就可作为模板，在逆转录酶催化下在体外合成与该mRNA互补的DNA，称为cDNA。 逆转录酶发现的理论与实践意义： 第十二章 核酸的生物合成 1983年,发现人类免疫缺陷病毒(human immune deficience virus,HIV),感染T淋巴细胞后即杀死细胞,造成宿主机体免疫系统损伤,引起艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)，该病毒为逆转录病毒。 第十二章 核酸的生物合成 不能把“中心法则”绝对化，遗传信息也可以从RNA传递到DNA。促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究，为肿瘤的防治提供了新的线索。目前逆转录酶已经成为研究这些学科的工具。 因发现逆转录病毒的遗传物质而获1975年诺贝尔奖的三位科学家 六、DNA损伤的修复 DNA在复制时产生错配，病毒基因整合，某些物化因子如紫外光、电离辐射和化学诱变等，都可能使DNA的结构及功能发生改变。从而引起生物突变，甚至导致死亡。 DNA的损伤与DNA突变： 第十二章 核酸的生物合成 DNA突变： DNA的核苷酸顺序永久性的改变称为DNA的突变。其主要形式有： 1.点突变：DNA分子中一个碱基对替代另一个碱基对称为点的突变。 2.插入作用：DNA分子中插入一个或几个碱基称为插入作用。 3.缺失作用： DNA分子中缺失一个或多个碱基对称为缺失作用。 第十二章 核酸的生物合成 DNA突变可能导致肿瘤的发生: 沉默突变：突变影响非必需的DNA或突变对一个基因的功能的影响可忽略，称为沉默突变。 回复突变：一些突变可以克服第一次突变造成的影响，这类突变称为回复突变。 动物细胞的突变与癌的发生有强烈的相关性。 第十二章 核酸的生物合成 着色性干皮病：对嘧啶二聚体和大的DNA损伤修复酶的缺失而产生的一种皮肤癌。 通常生物体DNA的损伤有一系列的修复机制，如：错配修复、碱基的切除修复、核苷酸的切割修复、直接修复、重组修复等。 第十二章 核酸的生物合成 DNA损伤的修复机制: 1、参与错配修复的酶与蛋白质 Dam甲基化酶 ; MutH、MutL、MutS蛋白 ; 解螺旋酶Ⅱ ; DNA聚合酶 Ⅲ ; 外切酶Ⅰ、Ⅹ 、Ⅶ ； RecJ核酸酶 DNA连接酶 ； SSB （一）错配修复 第十二章 核酸的生物合成 MutS识别并结合与碱基错配处 MutH-Mut二聚体结合后沿两个方向移动，形成DNA环，直至遭遇半甲基化的CTAG。 MutH在CTAG的5’-端切开一个切口，核酸外切酶Ⅰ、Ⅶ沿3’ →5’方向切除含配错碱基的新链 DNA聚合酶Ⅲ补缺，DNA连接酶连接切口。 高度耗能的错配修复 碱基的切除修复 （1）DNA糖基化酶切除损伤的碱基产生无碱基酸 （2）无碱基核酸内切酶在无碱基酸处切开产生切口。 （3）DNA聚合酶Ⅰ将无碱基酸切除并填补缺口。 （4）DNA连接酶连接切口。 核苷酸的切除修复 DNA解螺旋酶 光解酶 uvrB、uvrA蛋白结合 uvrB产生3’-端切口 uvrC产生5’-端切口 DNA聚合酶Ⅰ或Ⅱ DNA连接酶 uvrD切除 直接修复 引发体可以沿模板链5’ ? 3’方向移动,具有识别合成起始位点的功能，移动到一定位置上即可引发RNA引物的合成。移动和引发均需要ATP提供能量， n’蛋白具有ATP酶的活力。引发体的移动与复制叉移动的方向相同，与冈崎片段的合成方向相反。 引物合成酶与引发前体 第十二章 核酸的生物合成 作用特点： 大肠杆菌和其它细菌的DNA连接酶要求NAD+提供能量；在高等生物和噬菌体中，则要求ATP提供能量。T4噬菌体的DNA连接酶不仅能连接双链DNA上的粘性切口，而且能连接无粘性末端的平头双链DNA。 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用。 第十二章 核酸的生物合成 (4