利用IBV重组N蛋白建立ELISA抗体检测试剂盒的研究-传染病与预防兽医学专业论文.docxVIP

中文摘要本研究利用表达鸡传染性支气管炎病毒Gray株N蛋白的基因工程重组菌，表达IBV-N 中文摘要 本研究利用表达鸡传染性支气管炎病毒Gray株N蛋白的基因工程重组菌，表达IBV-N 蛋白，并利用表达载体上所带的6个组胺酸的特点，应用金属螯合填料将其纯化。用纯化 的IBV-N蛋白作为包被抗原，成功地建立了一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法， 并初步组装成试剂盒。 对ELISA反应条件进行摸索，并确定了最适工作条件，研究结果表明，／重组蛋白最适 包被浓度为O．58微克，毫升，最适包被条件为4C过夜t血清稀释度为I：100，ImP。兔抗 鸡IgG的最适工作浓度为l：1000，待检血清和酶标二抗的反应时间均37(230分钟，底物 在室温显色10分钟。根据已经建立的ELISA方法及反应条件，确定阴阳性临界值为O．14。 用本试剂盒检测已知的IBV单特异性血清Gray,Conn，Ark99，T，H，sE-17，B，Mass41， 以及两个国内分离株的单特异性血清，均呈阳性反应。而与已知的SPF鸡血清，非免疫鸡 血清及大肠杆菌的Ol，02，西8单特异性血清呈阴性反应。用本试剂盒检测IBD，EDS ‘76， ND lasota,ND￡‘8，AIV的H9等单特异性血清无交叉反应，说明建立的ELlSA具有 很好的特异性。反应板的重复性试验说明本方法的重复性好。、1 (用已建立的ELIS