聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳.PPT

聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳 SDS实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS) 分离蛋白质的原理和基本操作技术。 实验原理 蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离 而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI) 时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动； 当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正 电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中 移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋 白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(Acr)和交联 剂甲叉双丙烯酰胺(Bis) 在聚合剂过硫酸铵(APS)和 催化剂TEMED的作用下聚合交联成三维网状结构的 凝胶。 本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺 用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样， 当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶 时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由 于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通 过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的 速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移 动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压 缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛 效应。 浓缩胶的作用：浓缩效应 浓缩胶中的氯离子形成移动界面的先导边界， 而电泳液(pH8.3)