噻唑兰知识讲解.pptVIP

法 ;一、原理;二、试剂材料准备与实验仪器;三、实验步骤;）吸掉上清，每孔加?无的，每板设对照（加? ）。 ）加 （有毒性）。用无的稀释 (储存液?，需预试寻找最佳稀释度，：) ）加入不同浓度的待测物，以为例，加入，，，，，，。（在终体积为的孔板内，终浓度为，，，，，，，所加入的试剂均需考虑加入浓度和终浓度。） ），℃孵育小时，倒置显微镜下观察。;）每孔加入 溶液（ ，即），继续培养 。）终止培养，小心吸去孔内培养液。）每孔加入 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡 ，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪（校准）测量各孔的吸光值。）对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、、二甲基亚砜），每组设定复孔。;）收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度×，按次序将①补足的（无血清）培养基 ；②加 （有毒性）用培养液稀释 (储存液?，需预试寻找最佳稀释度，)；③需检测物；④细胞悬液（即×孔），共加入到孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照。 ）置℃，孵育小时，倒置显微镜下观察。;）每孔加入 溶液（ ，即），继续培养 。（悬浮细胞可使用，等，培养 后可跳过步骤），直接酶联免疫检测仪（校准）测量各孔的吸光值））离心（转），小心吸掉上清，每孔加入 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡 ，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪（校准）测量各孔的吸光值。）对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、、二甲基亚砜），每组设定复孔。;四、结果统计学处理;五、注意事项与常见问题;）孔板在培养箱中，由于湿度不够，而培养箱由于具有一定的温度，使得边缘的孔水分蒸发较快，导致培养基中各种成分浓度变化增大，导致细胞状态不同。对于这种现象，边缘孔用无菌水填充并要保证培养箱中的湿度，减少开关培养箱的次数和时间。）注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。建议使用连续加样器。）没有去掉上清直接加，沉淀会很难溶解。加前要把液体吸掉，但培养液里的紫色结晶可能会吸去，也可在倒之前先用平板离心机离心孔板，，分钟，然后吸掉上清。）为了减少误差，培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞，而不作为指标检测孔。）除置摇床上低速振荡 ，使结晶物充分溶解外，可用枪头吹打，加快溶解，效果亦可；或放入度放孵箱分钟溶解结晶。;）计算抑制率，公式[（对照本底）（给药本底）]（对照本底）*.;法的不足：;比色法中应采用分析纯二甲基亚砜作为甲眃溶解剂 中国免疫学杂志 年第期第卷 免疫学技术与方法;Summary