失巢凋亡与乳腺癌细胞转移有关的蛋白质组学研究-营养与食品卫生学专业论文.docxVIP

贵阳医学院201 贵阳医学院 2011 届硕士论文 PAGE PAGE 10 摘要： 失巢凋亡与人乳腺癌细胞转移有关的差异蛋白质组学研究 专业：营养与食品卫生学 研究生：施磊 导师：孙晓红 沈立明 目的 （1）建立人乳腺癌细胞MCF-7的体外失巢模型，利用差异蛋白质组学方 法研究失巢培养与贴壁培养的MCF-7细胞的蛋白表达变化，了解失巢凋亡在肿瘤 细胞转移过程中的分子机制。（2）探讨“嵌入式死亡”在MCF-7细胞失巢过程中 的作用及其相关分子信号。 方法（1）采用阴离子聚合物Poly-HEMA(多聚2-羟乙 基甲基丙烯酸脂)包被的六孔板对MCF-7细胞进行多轮悬浮培养， 利用流式细胞仪 以及激光共聚焦显微镜，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法观察非失巢组和失巢组的 细胞凋亡率以及细胞形态变化，确定失巢培养“驯化”终点，获得具有高抗失巢 凋亡特性的MCF-7细胞作为后期实验细胞。收获失巢终点的MCF-7细胞及正常贴壁 MCF-7细胞，并提取总蛋白，进行双向凝胶电泳（2-DE）与基质辅助激光解吸电 离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)检测，鉴定表达差异的蛋白质点并选 取部分进行免疫印迹验证，并以高转移特性的肿瘤细胞作为阳性对照。（2）失巢 驯化MCF-7细胞，收集每轮次培养6h的细胞并采用CellTracker细胞示踪染料进行标 记，激光共聚焦显微