怎样用好液相色谱资料文档.pptVIP

* 怎样用好高效液相色谱 福立分析仪器有限公司 液 相 色 谱 仪 的 使 用 流动相及储液器 1.尽量使用HPLC级的溶剂与试剂. 2.最好使用专用的溶剂瓶来放置流动相 3.改变流动相时防止交叉污染. 4.不要使用陈旧的流动相. 5.定期更换流动相储液瓶. 6.定期清洗烧结不锈钢吸滤头. 7.定期清洗烧结不锈钢吸滤头. 液 相 色 谱 仪 的 使 用 对流动相的要求 由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力， 并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影 响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选 择性。 （2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意 选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫 外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此 辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严 重干扰组分的吸收测量。 液 相 色 谱 仪 的 使 用 对流动相的要求 （3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度 也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕 量杂质的存在，将使截止波长值增加50—1OOnm。 （4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。 （5）低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分 离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于 低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或 检测器内形成气泡，影响分离. 液 相 色 谱 仪 的 使 用 常用流动相的紫外截止波长 液 相 色 谱 仪 的 使 用 常用流动相的强度参数 液 相 色 谱 仪 的 使 用 设备和材料：溶剂过滤器、真空泵、0.45u或更 细的水性滤膜和有机滤膜 过滤的方法：用加了滤膜的溶剂过滤器和真空泵 抽滤 过滤的目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞 色谱柱，尤其是使用无机盐配制 的缓冲液。 必须做! 溶剂和水的前处理：过滤 液 相 色 谱 仪 的 使 用 设备和材料：超声波清洗机 脱气的目的：除去流动相中溶解或因混合而产生 的气泡 气泡对测定的影响： 1）柱流量不准 2）检测器基线波动 脱气注意点： 1）每天脱气(无在线脱气器时） 2）混合溶剂脱气时间不能过长 必须做! 溶剂和水的前处理：脱气 液 相 色 谱 仪 的 使 用 自动进样器 手动进样器 原理：六通阀 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 进样器 样品装填状态 (LOAD) 手动进样器原理图 注射状态 (INJECT) 液 相 色 谱 仪 的 使 用 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 柱温控制的优点： 使用柱温箱 液 相 色 谱 仪 的 使 用 高压输液泵 1.每次使用后要把泵中的含盐缓冲液洗干净，防止 盐的沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂 中。 2.使用HPLC级的流动相试剂. 3.使用不锈钢烧结吸液滤头. 4.用纯水或双蒸蒸馏水，流量3～5ml/分，冲洗15分 钟，冲洗时必须打开排放阀（逆时针拧松） 必须做! 使用输液泵的注意事项 液 相 色 谱 仪 的 使 用 高压进样阀 必须做! 每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐.防 止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子.冲洗方法见进样阀 说明书. 严禁用! 严禁使用气相色谱那样的尖头针进样. 根据情况定 在注射针前加装针式过滤器,防止样品中的微粒进入进样 阀. 液 相 色 谱 仪 的 使 用 液相色谱柱 1.流动相或溶剂的化学腐蚀性不能太强. 2.避免样品微粒在柱头沉积. 3.防止过高压力冲击色谱柱. 4.流动相pH大于7时要使用保护柱. 5.正确制备样品,在样品注射器前加装针式过滤器. 6.色谱柱不用卸下前: a.必须洗去缓冲液. b.防止产生微生物 c.用大于10%的有机溶剂充满整个色谱柱. d.柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封. 液 相 色 谱 仪 的 使 用 紫外检测器 每次做 1.流过池每次使用后连同色谱柱一起清洗. 2.使用脱过气的流动相,防止气泡卡在流过池内. 经常做 3.不定期的用强溶剂反向冲洗流过池(拆开柱子). 4.不定期的使用空流过池校正波长. 根据情况定 5.在流过池出口加装背压阀. 液 相 色 谱 仪 的 使 用 操作极限预防 1.严禁在无流动相时启动高压输液泵. 2.设定泵的上限压力(≤25Mpa)防止长期压力过高 损坏泵和进样阀. 3.设定泵的下限压力(0