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使器官原基、一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的技术。 脾、骨髓及白细胞 在悬浮中生长良好，细胞圆形，单个或小细胞团 生存空间大，数量多，传代方便，易收获，可获稳定状态 生物技术上：生产各种生技术产品。 狂犬病、小儿麻痹症等病毒疫苗、表皮生长因子、 干扰素、白细胞介素等 进行单克隆抗体制备。 科学研究上：病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等。 临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某 些疾病的治疗等。 已建立的人类疾病的转基因动物 __________________________________________________________ 疾病模型 基因转移方法 转导的基因 __________________________________________________________ 老年性痴呆征 显微注射 β淀粉样蛋白基因 Ⅱ型糖尿病 显微注射 胰岛淀粉样多肽基因 β地中海贫血症 显微注射 人β珠蛋白基因 镰刀形细胞贫血症 显微注射 人α和β珠蛋白基因 唐氏综合症 显微注射 Cu/Zn-SOD酶基因 卡氏肉瘤 反转录病毒转染 HIV tat基因 成骨不全症 显微注射 突变的α1胶原蛋白前体基因 自毁容貌症 ES细胞同源重组 突变HGPRT基因 ___________________________________________________________ 3．细胞核移植与激活 胞质内注射（直接） 方法 透明带下注射（融合） 重组细胞移入中间受体作体内或体外培养，发育至桑椹胚或囊胚过程。 羊、牛、猪——体内培养 大鼠、小鼠和兔——体外培养 4．重组细胞的培养 5．胚胎移植 代孕母体 外部特征明显与供体品种不同 繁殖性能强 体格稍大和健康品种 同期发情处理 移入子宫 个体选择 发育 (三)核移植技术的应用 1．制备转基因动物； 2．培育优良畜种，扩大良种种群 ； 3．开展动物克隆，拯救濒危动物； 4．与干细胞技术结合，开展治疗性克隆； 5．进行生物药物生产； 6. 研究生物学的基本问题 。 从转基因羊的 羊奶中提取出治疗 心脏病的药物 tPA 药物生产 (一) 基因转移概述 将外源基因导入受体细胞,并整合到受体细胞基因组中，使其遗传性状及表型发生一定改变的技术。 四、基因转移 1.基因转移概念 外源目的基因制备 外源目的基因有效导入受体细胞 筛选携有目的基因细胞 2.基因转移过程 ▲采用限制性内切酶，从生物组织中获取。 ▲通过 mRNA 合成 cDNA。 ▲ 人工合成 DNA 片段。 ▲ 聚合酶链式反应（PCR）扩增特定基因片段。 （1）目的基因选择 3.基因转移方法 （2）目的基因克隆 ★通过载体在宿主中克隆 选择载体 目的基因与载体连接 重组体导入受体细胞 ★通过 PCR反应克隆 （3）目的基因转移 电穿孔法 显微注射法 脂质体包埋法 磷酸钙介导DNA共沉淀法 病毒介导法 （二）转基因动物 稳定整合入基因组中的外源基因，能通过生殖细胞传给后代，并发育成完整个体的动物. 1.转基因动物概念 选择合适的体外培养系统和宿主动物 转基因细胞胚胎发育及鉴定 筛选所得的转基因动物 基因转染的受精卵细胞 2.转基因动物过程 以 RNA 为遗传物质，经反转录生成 DNA 后嵌入宿主基因组中，通过合成 RNA 及蛋白质壳包装而成的病毒。如HIV。 反转录病毒法 反转录病毒 显微注射法、逆转录病毒感染法、胚