临床化学常用分析方法课件.doc

临床医学检验主管技师考试辅导《临床化学》 临床化学常用分析技术 临床化学常用分析方法 一、光谱分析（分光光度技术） 利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术， 称为光谱分析技术。具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。 发射光谱分析：荧光分析法和火焰光度法 吸收光谱分析：可见及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法 散射光谱分析：比浊法 二、 电泳分析 在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。 三、离心技术 离心技术分为制备离心技术和分析离心技术。制备离心技术主要用于物质的分离、纯化，而分析离心 技术主要用来分析样品的组成。 四、 层析技术 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由固定相和流动相组成。 五、 电化学分析技术 利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法。 包括电位法、电导法、电容量分析法。 离子选择电极法：离子选择电极（ ISE）能对某特定离子产生响应，在一定范围内，其电位与溶液中特 定离子活度的对数呈线性关系，因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度。 例题 用于分离不同分子大小蛋白质的方法是 A. 琼脂糖凝胶电泳 第 1 页 临床医学检验主管技师考试辅导《临床化学》 B. 凝胶层析 C.密度梯度离心法 D.免疫比浊法 E. 电化学分析法 [ 答疑编号 700812140101] 【正确答案】 B 血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术 一、酶反应动力学原理 酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素，定量时的观察对 象是总单位时间内底物的减少或产物增加的量。 当底物 [S] ＞＞K m时， 公式可近似为 V＝Vmax；从理论上说只有测定的是酶 Vmax，反应速度才和酶量成 正比。 二、酶活性的定义及单位 在实验规定的条件下（温度、最适 p H、最适底物浓度时），在 1 分钟内催化 1μmol 底物发生反应所需 的酶量作为 1 个酶活力国际单位（ U）。 习惯用 U／L 来表示体液中酶活性浓度。 三、测定酶活性浓度的两大类方法 （一）固定时间法（取样法） （二）连续监测法：酶耦联法（指示酶、辅助酶） （三）影响酶活性测定的因素 1. 底物浓度的影响：底物的种类和浓度。多种底物中， Km最小的底物往往是此酶的生理底物。 2. 反应体系的最适 p H、缓冲液的种类和浓度。 3. 温度的控制： 37℃。 第 2 页 临床医学检验主管技师考试辅导《临床化学》 四、代谢物浓度酶法测定 （一）代谢物酶促终点法测定 1. 一步法：最简单的底物法测定。 2. 酶促耦联法：工具酶（指示酶、辅助酶） 在临床生化测定中，最常用的耦联指示系统有两个：一个是脱氢酶系统，另一个为氧化酶系统。 ＋ ＋ 脱氢酶系统：测定 NAD 或 NADP在 340nm处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度。但会受到内源 性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸／丙酮酸的干扰。 （二）动力学法测定：实际操作中，测定两个固定时间的吸光度差值，只要此期间待测物消耗＜ 5%， 就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度， 所以动力学法有时又称为固定时间法 。 与终点法相比，动态法测定中待测物无须完全转化，故工具酶的用量较少。 产物的堆积和样品色原对动态法影响较小，而对终点测定法影响较大。如碰到乳糜或溶血，在做终点 法测定时，有时需设样本空白。 第 3 页