桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞抑制作用的体外研究.docVIP

PAGE PAGE 1 桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞抑制作用的体外研究 　　【摘要】目的：体外研究中药桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。方法：以3种人口腔鳞状细胞癌细胞株为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）比色法观察桂皮醛不同质量浓度、不同作用时间下对各细胞株增殖的影响。应用SPSS　16.0软件对数据进行方差分析。结果：与空白对照组相比，256、128、64、32mg?L-1质量浓度组的桂皮醛对人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖表现出明显抑制作用，且抑制作用随着药物质量浓度的升高而加强，呈现明显的剂量-效应关系。药物作用时间24h时，作用质量浓度16mg?L-1时，对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株抑瘤率达到58.33％；作用质量浓度为32mg?L-1时对KB细胞及人颊黏膜鳞状细胞癌BCaCD885细胞株的抑制率分别为66.08％、76.61％，其抑制率随着药物作用时间的延长而增加。结论：桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用与质量浓度和作用时间有关，中、高浓度的桂皮醛对3种人口腔鳞状细胞癌细胞增殖均具有明显的抑制作用，在一定程度上肯定了桂皮醛的抗肿瘤作用。 　　【关键词】桂皮醛；口腔鳞状细胞癌细胞；噻唑蓝 　　【中图分类号】R739.8 　　【文献标志码】A 　　桂皮醛别名为肉桂醛，具有抗炎、抗菌、诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。目前有关桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞影响的报道较少。本研究旨在探讨桂皮醛对人口腔鳞状细胞癌细胞株生长的影响，以期能进一步验证桂皮醛的抗肿瘤活性。 　　1　材料和方法 　　1.1主要试验材料 　　桂皮醛（中国医药上海化学试剂公司），批号为F030516；KB细胞株、人舌鳞状细胞Tca8113细胞株、人颊黏膜鳞状细细胞癌BCaCD885细胞株（口腔疾病研究国家重点实验室，四川大学）；RPMI1640培养液（Gibco公司，美国）；小牛血清（成都哈里生物公司）；噻唑蓝（methyl　thiazolylte-trazolium，MTT），每支250mg（Sigma公司，美国）；二甲基亚砜（上海药品制剂公司）；倒置相差显微镜及照相系统（Nikon公司，日本）；血细胞计数板（浙江求精医药公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1细胞培养液的配制　取100mL小牛血清转移至约900mL　RPMI1640培养液中混匀，使其成为含10％小牛血清的培养液。按照同样的方法配制含20％小牛血清的培养液。加入碳酸氢钠溶液调节pH值为7.4。然后过滤分装至消毒好的100mL盐水瓶中，标记，-20℃保存，备用。 　　1.2.2桂皮醛溶液的配制　取桂皮醛原液24.4μL，加入含小牛血清的RPMI1640培养液至100mL，混匀，过滤，得到质量浓度为256mg?L-1的药物溶液。再用对倍稀释法稀释成终质量浓度为128、64、32、16、8mg?L-1的桂皮醛溶液，分装于消毒好的青霉素瓶中，-4℃保存，备用。 　　1.2.3MTT法检测　采用256、128、64、32、16、8mg?L-16种质量浓度的药物溶液，以24、48、72h为作用时间，用MTT法观察3种口腔鳞状细胞癌上皮细胞的生长变化，与不加药物的空白对照组比较细胞生长率的差异。1）Tca8113细胞株和KB细胞株：取对数生长期的细胞用于实验，用血细胞计数板计数，调整细胞悬液计数为每毫升3×104个，分别接种于96孔板中，每孔200μL。置于37℃、5％CO2恒温细胞培养箱内孵育，待培养细胞贴壁后，加入含不同质量浓度的桂皮醛培养液，分别继续孵育24、48、72h。每个质量浓度设6个复孔，周边空白孔加磷酸盐（phosphate　buffered　saline，PBS）缓冲液。孵育到规定时间后，轻轻取出一块96孔板，吸出培养液，弃之，PBS缓冲液轻轻洗涤，每孔加入180μL的RPMI1640培养液，再加入20μL的MTT溶液37℃、5％CO2继续培养4h后终止培养，吸出孔内培养液，每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶充分溶解后，在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。2）BCaCD885细胞株：取处于对数生长期的细胞用于实验，用血细胞计数板计数，调整细胞悬液计数为每毫升1×105个，MTT方法同前。 　　1.2.4细胞生长抑制率计算　细胞生长抑制率=（1-试验组平均吸光值／对照组平均吸光值）×100％。细胞生长抑制率≥30％判定为药敏试验阳性，细胞生长抑制率 　　1.2.5统计学处理　所有数值以均数±标准差表示，应用SPSS　16.0软件进行方差分析，以P 　　2　结果 　　2.1倒置相差显微镜下观察细胞生长情况 　　2.1.1KB细胞的生长情况　倒置相差显微镜观察发现，KB细胞贴壁后细胞呈多角形爬壁生长，折光性强，轮廓清楚，待细胞铺满瓶底时，呈