选修三1.2 基因工程的基本操作程序课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （一）转化： ——目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 ①特点: 能感染_______________________，对单子叶植物无感染能力；________________可转移至受体细胞并整合到其染色体上 双子叶植物和祼子植物 Ti质粒的T-DNA （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 ①特点: ②过程: 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 （2）基因枪法 是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 是我国科学家独创的一种方法。我国的转基因抗虫棉就是用这种方法获得的。 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 2.将目的基因导入动物细胞 ——显微注射技术 ①受体细胞类型： 受精卵 ②操作程序: 提纯含目的基因的表达载体 取受精卵（可体内或体外受精） 显微注射 培养成早期胚胎 发育成具有新性状的动物 移植到子宫或输卵管 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 2.将目的基因导入动物细胞 3.将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞的原因（优点）： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少等 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 2.将目的基因导入动物细胞 3.将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞的原因： ②常用菌及处理方法： 大肠杆菌 ——Ca2+处理 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 2.将目的基因导入动物细胞 3.将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞的原因： ②常用菌及处理方法： ③过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 基因表达载体与感受态细胞 在缓冲液中混合 感受态细胞吸收DNA 一定温度 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 方法: 基因探针： DNA分子杂交技术 放射性同位素等标记的DNA分子 15N 15N 探针 14N 14N 转基因生物的DNA 变性 变性 四、目的基因的检测与鉴定 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 四、目的基因的检测与鉴定 ②检测目的基因是否转录出mRNA 方法： 分子杂交技术 15N 15N 探针 14N 14N 转基因生物的mRNA 变性 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 四、目的基因的检测与鉴定 ②检测目的基因是否转录出mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法： 抗原-抗体杂交 鉴定——个体生物学水平的鉴定 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 例1.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 0、2 高 ◇◆ ◇要点归纳◇◆ ◇ （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是___________ ______________________________________。 SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 ◇◆ ◇要点归纳◇◆ ◇ （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________________ ______________________________________。 质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 ◇◆ ◇要点归纳◇◆ ◇ （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 DNA连接 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了