疟原虫镜检技术(2015).pptVIP

血片的制作与染色 显微镜的使用与维护 3. 玻片未加油时观察标本应按：低倍→高倍→油镜程序。如在加油区内重找目标应按照：低倍→油镜程序，不要经高倍镜，以免油沾污镜头。 注意保护镜头，切不可压碎标本被片，损坏镜头。 6. 油镜使用完毕，需用擦镜纸沾取少量二甲苯将油擦去，并将残留的二甲苯擦。 7.使显微镜的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈“八”字形置于载物台上； 8 显微镜应存放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光下暴晒，注意防潮生霉； * * * * * * * * * * * * * * * * * （3）厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜。 （4）制成的血片在未干前不能倾斜放置，待其自然干燥，不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果． 血片制作注意事项 （1）染料溶剂的质量 （2）染液的新旧 （3）染液稀释后使用时间 原液必须临用时稀释，随配随用。 （4）染液的稀释浓度 （5）染色时间 (6) 染色稀释用水:Ph7.0-7.2 染色质量影响因素 （7）血膜在制备后应尽量能在当天染色，一般夏天不超过48小时，冬天也不能超过72小时。 新制血片染色时厚血膜无需溶血 放置多时的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上进行溶血. 疟原虫密度计算 疟原虫密度计算 计算疟原虫密度的三种方法： ● 白细胞原虫密度计数法 (厚血膜 WHO) ● 半定量计数法 (厚血膜) ● 红细胞感染密度计算法(薄血膜) 白细胞原虫密度计数法 镜检厚血膜，按视野顺序，记录200个白细胞中的疟原虫数，如果原虫密度较低，可增加白细胞，计数500-1000 个。 密度单位:原虫数/μl 计算公式：疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血白细胞数 = 疟原虫数/μl血。 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8000个白细胞计数(国际标准) 。 疟原虫密度计算 厚血膜的疟原虫计数 从血膜的左上角开始，横向。 计数1个视野后，每次间隔5个视野,再计数。 厚血膜 疟原虫密度计算 1.学习镜检疟原虫之前，必须熟悉显微镜的基本构造，使用方法和维修与保养。防止油镜进灰、进油和发霉。 2.疟原虫的厚薄血片都必须在油镜下观察，显微镜用光要充足。包括反光镜、光圈、聚光器要达到油镜使用的最佳限度。 显微镜检查注意事项 显微镜检查注意事项 4.视野模糊不清 显微镜问题： 镜头镜油用量、沾污灰尘或含有气泡； 油镜头破损、进油或有霉斑、灰尘； 显微镜用光调整不足。 血片问题： 载玻片不洁、毛玻璃样或有霉斑； 血片染色过度或血膜过厚。 显微镜检查注意事项 显微镜检查注意事项 5. 应先学会看薄血膜，掌握薄血膜上各期的形态特征后，再学看厚血膜。 对熟练的镜检员一般以镜检厚血膜为主,以提高阳性检出率，薄血膜可作虫种鉴定及形态识别之用。 谢 谢 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 江苏省寄生虫病防治研究所 顾亚萍 疟原虫镜检技术 疟原虫的基本形态特征 血片制作与染色 疟原虫计数 显微镜的维护与保养 疟疾是由蚊子传播的寄生虫病，它的病原体是疟原虫。 寄生于人体的疟原虫有4 种 疟原虫基本结构 疟原虫基本构造为核、细胞质（胞浆）和疟色素。 原虫经姬氏Giemsa或瑞氏Wright染色： 核呈红色,胞质呈兰色，疟色素为本色 胞浆 疟色素 核 1.核 呈鲜红色，呈圆形或椭圆形。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。 疟原虫基本结构 2.细胞浆 蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。 疟原虫基本结构 胞浆 疟原虫基本结构 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异，疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。 间日疟原虫－－呈短棒状，黄褐色； 恶性疟原虫－－呈细砂状，黑褐色； 三日疟原虫－－呈砂粒状，深褐色； 卵形疟原虫－－与间日疟原虫相似。 3.疟色素 滋养体期： 早期、晚期滋养体 裂殖体期： 未成熟、成熟裂殖体 配子体期： 雌、雄配子体 疟原虫在RBC内各期形态各不相同 疟原虫在红细胞内按照生长发育繁殖的阶段不同 疟原虫基本结构 红细胞不涨大 1个RBC内2个以上原虫常见，环状体内可有2个核 环状体可贴在红细胞边缘 血片中除R、G外没有其他发育期 配子体呈新月形或腊肠形 成熟裂殖体约含16-32个裂殖子，排列不规则 可出现茂氏点 恶性疟（P.falciparum） 鉴定要点 红细胞通常涨大 薛氏点明显 环状体较粗大 滋养体胞浆有阿米巴样伪足 血片中可见各期的原虫形态 成