第11章荧光分析法.pptVIP

green fluorescence protein 荧光与荧光分析法（fluorescene and fluorometry) 荧光（fluorescene): 物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低能级返回基态时发射出的光。 荧光分析法（fluorometry)： 根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。选择性好，灵敏度高，检测限达10-10g/ml,甚至10-12g/ml。 电子能级的多重态 激发态→基态的能量传递途径 激发光谱与荧光光谱 excitation spectrum and fluorescence spectrum GFP的激发光谱与荧光光谱 激发光谱与发射光谱的关系 荧光的产生与分子结构的关系 长共轭结构 刚性平面结构 取代基 第一类：增加分子的?电子共轭程度， 使荧光效率提高，荧光波长增长。如 -NH2、-OH、-OCH3、-NHR、-CN。 第二类：减弱分子的?电子共轭程度，使荧光减弱甚至熄灭。如：-COOH、-NO2、 -C＝O、-X、-NO、-SH。 第三类： 对?电子共轭作用较小，对荧光的影响不明显。如：-R、-SO3H、-NH3+。 荧光试剂 能与弱荧光物质或无机离子反应生 成强荧光物质的试剂。可扩大荧光分析 法的应用范围。 荧光胺：测定脂肪伯胺和芳香伯胺。