基于pH调控的环β-1葡聚糖合成及结构鉴定Identificationofcyclicβ.pdfVIP

基于pH 调控的环β-1,2-葡聚糖合成及结构鉴定 ** ** 曲娟娟 张洪涛 周献超 贾雨辰 曹雪颖 詹晓北 (江南大学生物工程学院 糖化学与生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122) 摘要 目的：研究pH 调控对发酵法生产环β-1,2-葡聚糖的影响，并对pH 调控条件下的环葡聚糖 的结构进行解析。方法：以根瘤菌ATCC 1333 为研究对象，进行pH 调控与不调控的发酵过程分 析，并结合乙醇分级沉淀对pH 调控后的发酵液中多糖进行分离提纯，经Superose 12 层析纯化， 利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-MS)、单糖组成分析、电喷雾串联质谱 (ESI-MS)，傅里叶红外光谱(FTIR)，核磁共振(NMR)手段对葡聚糖进行结构鉴定。结果：提出两 阶段pH 调控发酵策略，生长期pH 控制为7.0，产糖期pH 控制为5.5，与自然发酵模式相比，环 葡聚糖产量增加了52%，细胞浓度增加了102%，并且发酵颜色不再发生褐化现象，更有利于后 续环葡聚糖的分离纯化。并确定pH 调控对根瘤菌ATCC 1333 发酵生产的葡聚糖的结构并无影响， 合成的环葡聚糖是以葡萄糖为单体，通过β-1,2 糖苷键连接的环葡聚糖，聚合度从 17-22，以19 为主的环状葡聚糖，无支链结构。结论：pH 调控对于发酵生产环β-1,2-葡聚糖的结构无影响，为 1 v 环β-1,2-葡聚糖的发酵工艺研究提供理论基础，也为研究β-1,2-葡聚糖提供可靠的糖源。 7 关键词 根瘤菌ATCC 1333 pH 调控 环β-1,2-葡聚糖 MALDI-MS ESI-MS NMR 8 中图分类号 Q815 7 1 0 . Identification of cyclic β-1,2-glucan produced 4 0 underpH control 8 1 0 QU Juan-juan ZHANG Hong-tao** ZHOU Xian-chao JIAYu-chen CAO Xue-ying ZHAN 2 Xiao-bei** : (Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology of Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, v Jiangsu 214122, China) i X Abstract [Objective] To study the effects of pH on the production cyclic β-1,2-glucan, and analyze a the structure of cyclic glucans under pH control. [Methods] Rhizobium radiobacter ATCC 1333 was n used to analyze the effect of pH on fermentation. The cyclic glucans were separated, purified and i h purified, then analyzed by matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass c spectrometry(MALDI-MS), monosaccharide composition analysis, electrospray ionization mass spectrometry(ESI-MS), fourier transform infrared sp