微生物检验技术考试要点(整理-中级)课件.docVIP

检验技术资格考试考点精要— — 微生物学检验（中级） 1. 生物学按界门纲目科属种分类， 种是最小单位。 病毒分类： 目、科、亚科、属、种。属名 --VRir us 结尾的单词,亚科名 --VRir inae结尾的单词, 科名 --VRir idae结尾的单词。 目名— VRir ales 。2004 年 ICTV 公布病毒分为： 73 个科、 11 个亚种、 289 个属。 2.结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要Ⅴ，Ⅹ因子才 能生长。 3.药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法 。常用单片纸碟法、试管稀释法（以抗 菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度 MIC或最低 杀菌浓度 MBC），两值越低则表示越敏感。 MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大， MIC 越小。 各药敏纸片间距不少于 24mm，距平板内缘不小于 15mm。 药物敏感实验判定标准 ：抑菌圈直径（毫米）： 20 以上极敏、 15~20 高敏、 10~14 中敏、 10 以下 低敏。不同的菌株、不同的抗生素纸片需参照 NCCLs 的标准或者 CLSI标准。 多黏菌素抑菌圈；在 9 毫米以上为高敏， 6— 9 毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。 4. 常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、 免疫荧光技术（IF ）、对流免疫电泳 （ CIE）、 免疫印迹技术。 5. 病原菌核酸的检测： 核酸杂交、 PCR技术、基因芯片技术。 PCR 技术— 是选择DNA或 RNA体外扩增技术，用标本提取 DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸 为引物， PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性 93-94 ℃（作用 1min氢键断裂形成单链DNA）、 退火 40-60 ℃（迅速冷却 30-60s 引物与 DNA模板结合，形成局部双链）、延伸 70-75 ℃（在 TaqDNA聚合 酶作用下， 以 A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料， 从引物 5’→ 3’端延伸， 合成与模板互补的 DNA链。）， 扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。引物是 PCR特异性的决定因素， PCR反应中 TaqDNA聚合酶、引物加量过多，可引起非靶序列扩增。 变性 DNA常发生一些理化及生物学性质的改变： 1 ）溶液粘度降低。 2）溶液旋光性发生改变。 3）增 色效应。热变性 DNA一般经缓慢冷却后即可复性 , 此过程称之为 退火 ，Tm低 25℃左右的温度是复性的 最佳条件。核酸实验中经常以迅速冷却至 4℃以下方式保持 DNA的变性 (单链)状态。 基因芯片技术（DNA芯片、 DNA微阵列）— 主要过程： DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探 针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。 核酸杂交（基因探针杂交技术） -- 是指单链RNA和 DNA或 DNA和 DNA或 RNA和 RNA，根据碱基配对 原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率＞ 70%（≥ 69%）为高度同源性，同源性在 60%以 上是一个种，同源性在 60%--70%是同一种内不同亚种，同源性在 20%--60%同一属内不同菌种，同源性 1 20%≤ 不同属的菌种。 AFLP的含义是 扩增片段长度多态性。有很大功能的 DNA指纹技术。一种是罕见切割酶，一种是 常用切割酶。具有 RFLP技术的可靠性和 PCR技术的高效性。 6.细菌诊断流程有： 双岐索引法，表解法，数字编码鉴定法。致病性岛：由基因编码决定的一团与 致病性相关的基因组。 7. 病原细菌确定原则： （郭霍 Koch 原则） 1、从一种疾病病人中能有规律地发现一种细菌 2、能够 分离这种细菌获得纯培养 3、把这种细菌的培养物引入易感动物体内，可以引起与病人类似的疾病 4、 在实验感染引起的疾病中仍然能够分离同一种细菌。 8. 杆菌肽用于 A（敏感）与非 A群链球菌的鉴定。 O/129 抑菌试验对弧菌有用而对气单胞菌无用。 9. 奥普托欣试验：肺炎链球菌敏感。 10.杂交分： 斑点，菌落原位， Southern （DNA）印迹， Northern （RNA，DNA）印迹。 11. L 型细菌 ：细胞壁缺陷（形态多样，染色不定，可过滤，渗透压敏感，生化减弱等）培养应高 渗透压（ 3-5%氯化钠、 20%蔗糖），琼脂浓度 0.5 以下半固体培养基。染色多为G染阴性，形态不一（巨 球形是特征），固定要用 10g/L 鞣酸不能用火焰。 增殖：以二分裂、出芽、巨形体释放颗粒方式。一般菌落有： 油煎蛋样（ L），颗粒型（ G），丝状 菌落（ F），鉴定要点：染色易变多形性，生长在增菌液中微浑，颗粒样沉淀或沿试管壁生