荧光定量分析方法.pptVIP

* 第二节 荧光定量分析方法 一 荧光强度与物质浓度的关系： 由于荧光物质是在吸收光能而被激发之后才发射荧光的，因此溶液的荧光强度与该溶液中荧光物质吸收光能的程度以及荧光效率有关。 溶液中荧光物质被入射光(I0)激发后，可以在溶液的各个方向观察荧光强度(F)。但由于激发光的一部分被透过，因此，在激发光的方向观察荧光是不适宜的。一般是在与激发光源垂直的方向观测。 设溶液中荧光物质浓度为C，液层厚度为L。荧光强度正比于被荧光物质吸收的光强度，即： F∝(I0-I) 为常数，其值取决于荧光效率 根据Beer定律 （2） 将(2)待人(1)，得 即 （3） （1） 根据 ，在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系；但当ECl0.05时，(3)式括号中第二项以后的数值就不能忽略，此时荧光强度与溶液浓度之间不呈线性关系。 为荧光定量分析法的依据。 若浓度C很小，ECl之值也很小，当ECl≤0.05时，上式第二项以后的各项可以忽略。所以 （4） 荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，是因为： 荧光分析法中与浓度相关的参数是荧光物质发射的荧光强度，测量的方式是在入射光的直角方向，在黑暗或很弱背景上检测所发射光(荧光)的强度信号，测定的灵敏度取