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第2节 大肠杆菌表达系统 IL 11 MNCVCRLVLVVLSLWPDTAVAPGPPPGPPRVSPDPRAELDSTVLLTRSLLADTRQLAAQLRDKFPADGDHNLDSLPTLAMSAGALGALQLPGVLTRLRADLLSYLRHVQWLRRAGGSSLKTLEPELGTLQARLDRLLRRLQLLMSRLALPQPPPDPPAPPLAPPSSAWGGIRAAHAILGGLHLTLDWAVRGLLLLKTRL 1) 分子量、等电点 2) 信号肽 3) 糖基化 4) 蛋白酶裂解位点 5) 有无二硫键（根据C的数量初步判断） 2 分析基因的限制性内切酶谱，确定插入质粒的限制性内切酶位点 atgaactgtgtttg ccgcctggtc ctggtcgtgc tgagcctgtg gccagataca gctgtcgccc ctgggccacc acctggcccc cctcgagttt ccccagaccc tcgggccgag ctggacagca ccgtgctcct gacccgctct ctcctggcgg acacgcggca gctggctgca cagctgaggg acaaattccc agctgacggg gaccacaacc tggattccct gcccaccctg gccatgagtg cgggggcact gggagctcta cagctcccag gtgtgctgac aaggctgcga gcggacctac tgtcctacct gcggcacgtg cagtggctgc gccgggcagg tggctcttcc ctgaagaccc tggagcccga gctgggcacc ctgcaggccc gactggaccg gctgctgcgc cggctgcagc tcctgatgtc ccgcctggcc ctgccccagc cacccccgga cccgccggcg cccccgctgg cgcccccctc ctcagcctgg gggggcatca gggccgccca cgccatcctg ggggggctgc acctgacact tgactgggcc gtgaggggac tgctgctgct gaagactcgg 3 选择合适的表达系统 查看表达载体图谱及特性 插入位点是否合适 融合标签是否合适 目的基因 (IL 11)引物设计 ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲xxxxxx atgaactgtgtttg ccgcctggtc ctggtcgtgc tgagcctgtg gccagataca gctgtcgccc ctgggccacc acctggcccc cctcgagttt ccccagaccc tcgggccgag ctggacagca ccgtgctcct gacccgctct ctcctggcgg acacgcggca gctggctgca cagctgaggg acaaattccc agctgacggg gaccacaacc tggattccct gcccaccctg gccatgagtg cgggggcact gggagctcta cagctcccag gtgtgctgac aaggctgcga gcggacctac tgtcctacct gcggcacgtg cagtggctgc gccgggcagg tggctcttcc ctgaagaccc tggagcccga gctgggcacc ctgcaggccc gactggaccg gctgctgcgc cggctgcagc tcctgatgtc ccgcctggcc ctgccccagc cacccccgga cccgccggcg cccccgctgg cgcccccctc ctcagcctgg gggggcatca gggccgccca cgccatcctg ggggggctgc acctgacact tgactgggcc gtgaggggac tgctgctgct gaagactcgg xxxxxx ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ ▲ PCR技术克隆基因 PCR反应组分 94 ° C 2’ 94 ° C 30’’ 55 ° C 45’’ 72 ° C 1’ 72 ° C 10’ 酶切反应 1μl 10 x buffer（H，M，L） 1 μl 限制性内切酶 4 μl DNA (PCR产物, 质粒) 4 μl 灭菌水 Mix 37℃， 1-2 h 纯化酶切后的PCR产物、质粒 酚氯仿抽提, 或用kit纯化 连接反应 10 μl X μl 载体 X μl DNA X μl
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