微生物学实验-水中大肠菌群简易检测讲义(1).ppt

化学与生命科学学院 化学与生命科学学院 水中细菌总数的测定及大肠菌群的简易检测 实验八 了解水质状况与细菌数量的联系。 了解水中细菌总数的测定依据及应用，掌握水中细菌总数测定的方法及操作。 了解饮水健康与水中大肠菌群的联系，掌握水中大肠菌群简易检测的方法及操作。 实验目的 实验原理 水中细菌总数可以说明水被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大。水中细菌种类繁多，生长条件各异。在一种培养条件下满足所有细菌生长是不可能的。通常采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，测得水中细菌总数的近似值。 水中病原菌（如沙门氏菌、志贺氏菌等）多数源于病人和病畜的粪便，病原菌数量少且检测过程复杂。大肠菌群作为肠道内的正常菌，在粪便中数量大，且体外的存活时间与肠道致病菌相近，因此，一般采用测定大肠菌群数量来判断水源是否被粪便污染，并推测是否受肠道病原菌污染的可能。 实验原理 大肠菌群并非细菌学分类命名，不代表某一种或某一属细菌。是卫生细菌检测领域用语，指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。 大肠菌群是一群好氧和兼性厌氧、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，在乳糖培养基中经37℃培养24~48h，能产酸产气。主要包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属，这类菌是温血动物肠道内的正常菌群，随粪便污染水源。 测定大肠菌群的方法有多管发酵法、滤膜法和各种简便检测盒。国家标准中采用的多管发酵法分为三步：初发酵试验、平板分离培养和复发酵试验。 实验原理 实验原理 伊红美兰琼脂平板含有伊红与美兰染料，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境是，该两种种染料即可结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。 滤膜法是将水样通过一定孔径的滤膜，然后将滤膜放在适宜的培养基上进行培养计数。 实验原理 实验原理 我国1985年起实施的饮用水卫生标准（GB5749-85)规定：1毫升自来水中的细菌总数不得超过100个，每升自来水中肠道菌群不得超过3个。 实验内容 一、自来水中细菌总数的测定 1、采水样：开放水龙头使水流5min，以无菌三角瓶接取水样，迅速测定。 2、用无菌吸管分别吸取1ml水样与两个无菌平皿中，分别倒入融化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。 3、另取一无菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，作为空白对照。 4、凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h后计数，取两皿平均数作为1ml水样中的细菌总数。 实验内容 注意事项： 自来水取样时避免取样中造成污染。 自来水中含有余氯，可能对细菌有杀灭和抑制作用，会造成结果偏低或假阴性，可以加入少量硫代硫酸钠，与氯发生反应。 操作过程要迅速，避免杂菌污染。 倾注培养基时温度应冷却至45℃，避免烫死细菌。 实验内容 二、池水中大肠菌群的简易检测 1、采取水样：取学校“鉴湖”水面10~15cm，离岸边5cm的水样，立即测试。 2、稀释水样：取3支无菌试管，分别加9ml无菌水，加1ml水样到第一管内摇匀，再自第一管中取1ml至第二管中，如此稀释到第4管。 3、吸取第三、第四管稀释液各1ml至无菌平皿中，每一个稀释度重复两皿。 4、各倾注已经融化并冷却至45 ℃左右的伊红美兰琼脂培养基，立即摇匀。 5、凝固后倒置于37 ℃培养箱中培养24h后计数。 化学与生命科学学院 化学与生命科学学院