荧光PCR定量质量控制和防污染措施方案.docVIP

word格式文档 专业整理 解放军第三0二医院 王海滨 写在课前的话 近几年在临床检测病毒核酸和细菌核酸上，荧光定量PCR技术越来越广泛。但是如何进行治疗控制以及出现污染后怎样进行清除污染？本文主要讲述怎样来防止污染的产生。 一、荧光PCR定量的概述 （一）?荧光PCR定量的原理 实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 常规的PCR也就是电泳PCR，它是合成一个正向引物和反向引物为目的模板，即DNA或RNA作为一个模板扩增，扩增后通过跑电泳的方式来检测它存在与否，是相对量的变化。由于跑电泳经常导致产物外泄，因此污染的几率比较高。 近几年 PCR 扩增时在参入一对引物的同时参入单个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记单个报告荧光基团和单个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时， Taq 酶的5端～3端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有单个荧光分子构成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物构成完全同步。 通过荧光物质参入和TapMan探针技术来做实时荧