20第20节自动化仪器分析资料.ppt

第四节 自动化酶联免疫分析系统 1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。 （三）方法评价 优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 （二）方法评价　 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 1. 仪器测定技术要点 (1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测 　2. 抗原过量检测 　(1) 抗体适当过量 　(2) 对抗原过量进行阈值限定 仪器测定技术要点 开启机器，进行定标 反应阶段 抗原过量检测 (三)方法评价 散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。 　1.抗原抗体比例 　2.抗体的质量 　3.增浊剂的使用 4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位 7.标准曲线制备与质量控制 　（二）临床应用 免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ链、λ链、免疫球蛋白亚类；补体C3、C4；血浆蛋白如前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、转铁蛋白(TRF)、铜蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白(HP)、，C-反应蛋白(CRP)、载脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、类风湿因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入氧化剂发光 信号检测 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入AMPPD发光剂 信号检测 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 电化学发光反应 光信号检测 检测完毕 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。 （二）仪器测定技术要点 　⒈ 抗原抗体结合 　⒉ 加入Eu3+螯合抗体 　⒊ 加入酸性增强液 　4. 信号检测 增强液(enhancement solution)，使Eu3+抗体－抗原复合物的PH值降低至2~3，以利于Eu3+从复合物上完全解离下来，游离的Eu3+为增强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强液中的β-二酮体生成一个Eu3+在其内部的保护性胶态分子团，这是一个新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧光，信号的增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于Eu3+与抗体标记，后一种用于与解离下来的Eu3+螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为解离增强镧系元素荧光免疫(dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay, DELFIA) 　 　1. TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。 　2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，应选择应用。 　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 　1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的特性等因素。 　2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预处理，除去干扰成分。 　5.液路系统 　6.洗板系统 　7. 酶标板读数仪 　8.自动装载传递系统 　9. 计算机管理和信息系统 全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作速度快，自动化程度高，适合大批量样本的处理，如血站系统。 分体机，由于它有一个独立的全自动样本处理站，加样速度快，适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实验室。 1. 什么是免疫检验自动化？应用哪些技术？优点是什么？ 2. 免疫浊度分析的原理是什么？有哪些临床应用？ 3. 免疫胶乳比浊法和免疫散射比浊法的原理是什么？ 4. 定时散射比浊法和速率散射比