分子心血管学教育部重点室转基因动物平台.pptVIP

* 转基因动物平台 医学部中心楼8层 * 仪器设备： 显微操纵系统、倒置显微镜、自制防震台、细胞培养箱、超净台、方波电穿孔系统、高速冷冻离心机和独立的动物饲养室。 功能： 构建过表达心血管疾病相关基因载体，利用转基因或基因敲除的方法，制备心血管疾病小鼠和家兔的模式动物，为系统地研究心血管疾病病理机制、评价药物药效和药理提供体内研究的技术手段。 * Genetically Engineered Mouse Models: Transgenic ? characterize the ability of a promoter to direct tissue-specific gene expression ? examine the effects of overexpressing and misexpressing endogenous or foreign genes at specific times and locations in the animals * * 内皮细胞—Tie2 平滑肌细胞细胞—SM22a 神经系统— Neuron specific enolase, nestin, synapsin, GFAP 肝脏—Albumin, ApoE 脂肪—AP2 肾脏—Uromodulin, mSGLT‐2, mKAP2, CYP27B1 皮肤—Keratin‐5, keratin‐6 心脏—MHC, MLC2 Transgene Design: Representative Examples of Tissue-Specific Expression Profiles 全身表达—EF1，CMV 胰腺—Elastase 赢润生物（Yrbio）长沙市国家高新技术开发区 * * * Pros and Cons of Transgenics by Pronuclear Injection Pros: ? Relatively simple and efficient ? Generate transgenics in 3 months ? Long transgenes possible ? Potentially all species Cons: ? Multiple copies at a single locus ? Occasionally mosaic founders (late stage integration) ? 10% insertions result in phenotype due to disruption of endogenous gene ? Deletion, complex rearrangements of host genome ? Not all integrated transgenes are expressed. Expression level do not correlate well with copy number * 转基因平台建立 * 转基因平台运转模式 * 定动物 实验日期 实验用动物种类和数量 PMSG注射时间和量 　 实验日期 HCG注射时间和量 交配情况 动物年龄 饲养环境 光照周期 　 雄鼠淘汰 雌鼠淘汰 实验记录 操作人 赵芙洁 2011-10-8 2011-10-9 2011-10-10 2011-10-8 2011-10-9 2011-10-10 C57*5♀ C57*9♀ C57*5♀ 150ul（11:00AM） 150ul（11:00AM） 150ul（11:00AM） 赵芙洁，韩迎春 　 　 　 　 2011-10-10 2011-10-11 2011-10-12 150ul（10:00AM） 150ul（10:00AM） 150ul（10:00AM） 赵芙洁，韩迎春 C57♀：♂=1:1*5 C57♀：♂=1:1*9 C57♀：♂=1:1*5 ICR♀：结扎♂=1:1*18 ICR♀：结扎♂=1:1*18 ICR♀：结扎♂=1:1*18 3W 3W 3W 25℃ 25℃ 25℃ 7:00-19:00 7:00-19:00 7:00-19:00 * 实验日期 见栓动物数量 供体 受体 取卵开始时间 取卵结束时间 取卵数量 加热块温度 注射基因名称、片段确认和浓度 稀释离心情况 注射台温度 注射开始时间 注射卵数量 注射结束时间 存活卵数量 2011-10-6 操作人 10 王宇辉 2 8:00 9:00 80 36℃ PCSK9野生 TE稀释，3-5ng/ul，离心 35℃ 13:00 60 16:00 10 * 每只动物回输卵数量 回输动物体重① 戊巴比妥钠用量 回输情况 手术情况 第二天情况 第五天体重