转基因动物制药.pptVIP

* * * * * * * * * 三、实验动物的准备 (一)不育雄性公鼠:结扎公鼠与母鼠交配以后产生假孕母鼠。 (二)假孕雌性母鼠:作为获得外源基因即转基因胚胎的养母，要求6周龄至5 个月较合适，对种系无特殊要求。 (三)取受精卵的雌性母鼠：如果无特殊遗传背景的要求，一般用杂交F1受精卵较为理想。 (四)与卵供体母鼠交配的正常公鼠：公鼠性成熟约在6～8周，不同种系有些区别。 * 四、基因导入的方法 (一)显微注射法（主要技术手段 ）：在显微镜下，可借助显微操作仪，将毛细玻璃管直接插入受精卵的雄原核中(较大的原核),注入特定的外源基因,即为基因显微注射法。 (二)逆转录病毒感染法：以逆转录病毒作载体， 把重组的逆转录病毒载体DNA包装成高滴度病毒颗粒，感染发育早期的胚胎，将外源基因导入宿主的染色体内的方法称为逆转录病毒感染法。此法操作简单，可通过注射将重组病毒转移到囊胚腔内，也可将去透明带的胚胎与分泌重组病毒颗粒的细胞共培养，以达到将外源DNA 转移到胚胎中去的目的。 * 逆转录病毒感染法的优点是，重组逆转录病毒可同时感染大量胚胎。感染后的整合率高；外源DNA在受体细胞基因组中的整合通常是单拷贝的；不需要昂贵的显微注射设备。本法的缺点是，由于选用的受体是早期胚胎，不是受精卵，致使外源DNA 在动物各种组织中的分布不均,不易整合到生殖细胞中；由于病毒衣壳大小有限,限制了被