生化试验-双缩脲法测定蛋白质含量.ppt

* 我 * 我 实验 双缩脲法测定蛋白质浓度 实验目的 1.学习蛋白质含量测定的原理和方法 2.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法 蛋白质含量测定的原理和方法 微量凯氏定氮法 被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵。在凯氏定氮仪中加入强碱消化液，使硫酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中，然后再用标准酸溶液进行滴定，滴定所用无机酸的量(mol)相当于被测样品中氨的量(mol)，根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。 因为蛋白质含氮量通常在16 %左右，所以将凯氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。 消 化 CO2+SO2+H2O+NH3 ↑ +浓H2SO4 N NH3+H2SO4 (NH4)2SO4 蒸 馏 H2O+Na2SO4+NH3↑ (NH4)2SO4+NaOH 吸 收 NH3+H3BO3 NH4HB4O7+H2O 滴 定 NH4HB4O7+HCl+H2O NH4Cl+H3BO3 氮的总量测定—凯氏定氮法 原理：当脲加热至180oC时，两分子脲缩合，放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性条件下能与硫酸铜生成紫红色络合物，即发生双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构相似，故蛋白质与碱性硫酸铜也能形成紫红色络合物,在一定条件下其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用来进行蛋白质定量。最大波长位于540nm处