生物分子探针.ppt

分子探针简介分析化学新方法新技术 指导老师：阮源萍 学生姓名：张振 学　　号 写在前面 经典化学分析：沉淀剂、滴定剂、萃取 剂、指示剂和显色剂等 发展方向：微型化、仿生化、自动化、信息化 目前最高水平：DNA序列分析中标记碱基的四种分子荧光探针 生物分子探针 主要类型： 离子探针的生物及化学依据 大多数的酶要靠金属离子表现其活性 探针离子具有与原生物分子中的金属离子相同或相似的物理化学行为：如半径、化学配位性质、立体化学行为等，可以置换 蛋白质三级结构 蛋白质及酶的荧光探针 蛋白质是生物大分子，它能在溶液中与某些染料静电吸引或氢键结合，可用紫外可见光度法或荧光测定蛋白质。另外蛋白质含有氨基（—NH2 或—NH—），—SH，—COOH和=CO,可用与以上基团发生反应的荧光 衍生试剂对蛋白质标记，进而用色谱及电泳分离紫外可见或荧光检测蛋白质 蛋白质的荧光，主要是构成它的色氨酸，络氨酸和苯丙氨酸具有的荧光，通过蛋白质的天然荧光用荧光法检测比紫外吸收法灵敏。荧光探针是一类比蛋白质荧光发射较强荧光的染料，它吸附或共价结合到蛋白质上，荧光特性会发生变化，从而可以研究蛋白质的结构和测定蛋白质。这其中有一种叫做免疫荧光技术 核酸分子荧光探针及核酸染色 沿核酸的螺旋方向看，双螺旋表面有两个沟槽，一个宽槽和一个窄槽，这两个沟槽使碱基外露，为分子探针或其他分子与碱基作用提供了空间。 核酸染色剂及荧光探针的应用 溶液中核酸的定量测定 单分子核酸检测 核酸的凝胶染色体电泳分离检测 在荧光共振能量转移（FRET）技术中的应用 DNA序列分析 参 考 资 料 书目：分子探针与检测试剂 作者：张华山 王红 赵媛媛 出版日期：2002年7月 窄槽 宽槽 DNA序列分析中的荧光染料：在电泳分离荧光法检测DNA 序列分析中，通常分四组（A,C,G,T体系）进行，如果用 四种不同的荧光染料为探针,标记一个共同的引物，分别 用在 A、C、G、T四个反应体系中，等于用不同的探针 专一地标记了不同的碱基，利用各荧光探针光谱的差别 便可把不同的碱基区分开,因此选择一组四种合适的染料 成为关键， 它们应满足以下条件： (1)吸收和发射光谱应在可见光区，以降低散射和荧光背景； (2)各染料的荧光发射波长因该有明显不同，以便区分不同染料; (3)应有很强的荧光强度，以获得高灵敏度； (4)不严重干扰引物的杂交作用，使其不影响测序反应效率； (5)染料的存在不严重改变电泳谱图。 表二：菲啶和口丫啶类嵌入剂及其 与DNA结合物的有关性能 表三：含吲哚和苯并咪唑类嵌入剂及其 与DNA结合物的有关性能 核酸分子探针种类：目前作为核酸分子探针的有机 分子染料有几十种，按探针分子结构可分为： 菲啶和口丫啶类染料、吲哚和咪唑类染料、 碳菁阳离子染料、苯并呋喃酮（香豆素）类等。 表四：TOTO-1系列染料及其 与DNA结合物的有关性能 甲醇 不渗透膜；A~T选择；高亲合DNA标记 431/498 11 421 H2O; DMF 6 甲醇 不渗透膜；高亲合DNA标记；死细胞 染色；电泳prestain；氩-离子和He-Ne激光 528/617 7.0 528 DMSO 5 水或 甲醇 渗透膜；RNA/DNA的辨别测定；溶酶体标记；流动细胞光度法 500/526 53 500 DMF 4 甲醇 渗透膜；染色核酸和真核生物及一些细菌的细胞质 518/600 3.9 518 DMSO 3 甲醇 不渗透膜；死细胞染色；染色体和细胞计数染色 536/617 5.8 535 H2O， DMF 2 甲醇 不渗透膜；双股DNA嵌入剂；死细胞染色；染色体计数染色；电泳；流动细胞光度法；氩-离子激光 518/605 5.2 518 H2O DMSO