总酚含量测定.docVIP

一、?测定方法概述? 1.依据酚类物质可以被高锰酸钾氧化的性质，高锰酸钾滴定法? 2.酚类化合物在碱性条件下可以与4-氨基安替比林反应生成红色染料，比色? 3.酚羟基可与酒石酸铁中的铁离子反应生成蓝色络合物比色? 4.酚类物质还原福林试剂生成蓝紫色物质，比色? 二、高锰酸钾滴定法测多酚? 此方法多应用在茶叶上? 原理：酚类物质可以被高锰酸钾氧化，烟叶中还有一些酚类衍生物和非酚类物质也可以被高锰酸钾氧化，会使测定结果偏高。因此滴定须分两步进行：第一步滴定待测液中总还原性物质，第二步用明胶盐溶液将酚类物质沉淀后，测定待测液中其它还原性物质含量，二者之差就是样品中多酚含量。但是绿原酸不能被沉淀，因此，此法不易用来测定烟草多酚。0.1%靛红作指示剂。 ?酚类提取：采用沸水浴方法提取。 ?三、氨基安替比林比色法? 此方法用来测样品中挥发性酚类化合物，常常应用在食品，水等挥发酚的测定。灵敏度最高高。? 原理：酚类化合物在碱性溶液中，当有氧化剂铁氰化钾存在时，可以与4-氨基安替比林生成一种红色染料，用分液漏斗将红色染料萃取到氯仿层，在460nm处比色。用苯酚作标准曲线，计算出样品中挥发性酚类物质含量。? 1此方法酚的提取步骤比较麻烦：? 先在2.5mol/L硫酸溶液中加热回流1小时，将样品中中挥发酚提取出来。通入水蒸气把酚蒸馏出来，收集并定容。 ?2苯酚腐蚀性强，为结晶体，不好秤取。? 3蒸馏装置不能漏气，且所用的橡皮类物质需要事前用碱水浸泡，并水煮10min。 ?四、酒石酸比色法? 原理：酚类物质的羟基与酒石酸铁中的铁离子生成蓝色络合物，根据络合物溶液颜色深浅，在540nm处比色，可测出烟叶中酚类物质含量。以儿茶酚或没食子酸乙酯作标准溶液。可以用来测定烟草中的多酚。?此方法酚的提取与福林法测多酚提取步骤一样。? 五、福林法测烟叶多酚/总酚? 1.原理;?在碱性条件下利用多酚的还原性，多酚可以将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量城正相关，可以用分光广度计进行测定。 ?2.试剂和仪器：? 试剂：儿茶酚或没食子酸乙酯，钼酸钠，磷钨酸，Na2CO3? 仪器：水浴锅，721分光光度计，试管，三角瓶，漏斗，滤纸，移液管。? 3.?操作步骤：? 3.1待测液制备：50mg烟样于150mL三角瓶中，加入80℃蒸馏水50mL，80℃以上温度水浴提取30min（期间需要摇晃几次），取出冷却，过虑并定容至100mL容量瓶中。此为待测液。?? 3.2??测定：2支干试管，各加入5ml待测液，一支加福林试剂5ml，一支加5ml代替福林试剂，摇匀3分钟后，各加入5ml10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，以不加福林试剂的试管管为对照，700nm比色。 ?3.3?绘制标准曲线：? 儿茶酚母液：1mg/ml，再依次配制成100ml中含有儿茶酚0.5，1.0，1.5，2.0mg的4种不同浓度的标液。? 取5支试管，分别加入上述标液5ml，对照加蒸馏水5ml，然后各加福林试剂5ml，摇匀3分钟后，各加入5ml?10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，700nm比色。? 7总酚含量测定??参考韩富根的方法，略有改动，? 7.1样品处理：取鲜叶0.5g，加3ml?95%乙醇研磨成匀浆状，?再加5ml?95%乙醇过滤，用95%乙醇定容至25ml。以儿茶酚作标准曲线。? 7.2样品测定：取2?ml待测液于10ml离心管中，再加入2?ml福林试剂，摇匀，3min后加入10%碳酸钠2?ml振荡。静置1?h后700?nm处比色测定，以2ml蒸馏水代替待测液作为空白。根据标准曲线计算总酚含量。【七种与小麦近缘的野生植物对禾谷缢管蚜抗性的生化机制】? 7.3试剂配制? ①福林试剂：将钨酸钠25g、磷钼酸5g，磷酸12．5ml同蒸馏水188ml一道回流煮沸2h，冷却后用蒸馏水定容至1L。? ②10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用。 ?③酚标准溶液：先配制成100ml含儿茶酚60mg的溶液，再依次配制成100ml中含儿茶酚不同浓度0.5?1.0?1.5?2.0mg? (临用时再配)。10mg/100ml为母液? 标准系列的配置? 总体积ml 6 6 6 6 6 6 福林试剂ml 2 2 2 2 2 2 10%Na2CO3ml? 2 2 2 2 2 2 邻苯二酚ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水ml? 2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 浓度ug/?ml 0 10 20 30 40 50