第17章 免疫学实验技术 20171218.pptVIP

此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。 以测定抗原为例, 将特异性抗体吸附于固相载体；加入待测抗原和一定量的酶标已知抗原，使二者竞争与固相抗体结合； 经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。 2）ELISA竟争法 五、免疫荧光（Immunofluorescence） 是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。 分直接法、夹心法、间接法和补体法 免疫荧光 常用的荧光素主要有： 异硫氰酸荧光素 (FITC) ，最大吸收光谱为 490~495nm ，最大发射光谱为 520~530nm ，呈黄绿色荧光。 四乙基罗丹明 (RB200) ，最大吸收光谱为 570nm ，最大发射光谱为 595~600nm ，呈明亮橙色荧光。 四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) ，最大吸收光谱为 550nm ，最大发射光谱为 620nm ，呈橙红色荧光。 六、放射免疫测定 (RIA) 将同位分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法。 此项技术具有灵敏度高（可检测出 ng 至 pg 级的微量物质）、特异性强（可分辨结构类似的抗原）、重复性好、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等优点，因此广泛应用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物及肿瘤标志物等的分析与定量测定。 RIA 常用的放射性同位素有 125I、 135I、 3H、14C。 　 * * 在病毒的抗原抗体反应中，并不是整个的病毒粒子，而是有更小的粒子的抗原参与反应，这种更小的粒子的抗原称为可溶性抗原。例如流行性感冒感染时，细胞中可出现10纳米大小的可溶性抗原。可溶性抗原虽然是在感染过程中于细胞内产生的，但是在病毒粒子的组分中有时也包含它。 * * * * 猪瘟病毒的抗原性与具有共同抗原的牛病毒性腹泻-粘膜病 ... 均匀的溶液也是一个相，称为液相。 第一抗体：第一抗体就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。 一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。 二抗：可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗。 如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），则不需要二抗。但这样成本很高，因为一种一抗只识别一种底物。 所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记，再来检测一抗。而一抗识别底物。这样，当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。 * 第17章 免疫学试验技术 第一节 血清学试验 第二节 免疫标记技术 第一节 血清学实验 在体外鉴别抗原与抗体的试验通常有四个：凝集、沉淀、补体参与的反应、中和反应等. 因为这四种基本反应一般皆需要血清,所以体外的抗原、抗体反应又常常被称为血清学反应。(serological reaction) 一.血清学试验的类型　　　　　 二.血清学试验的一般特点　　　　 三.血清学试验的优越性 四.血清学试验的发展趋向 一.血清学试验的类型 协同凝集反应 凝集反应 沉淀反应 中和反应 补体结合反应 直接凝集反应 间接凝集反应 抗球蛋白实验 环状沉淀实验 絮状沉淀实验 琼脂扩散实验 血 清 学 反 应 分 类 经典的血清学反应： 1.凝集反应 (agglutination) 细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称为凝集反应。 反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素. 凝集反应是经典的血清学反应，使用历史悠久并一直沿用至今。 1896年， Widal——诊断伤寒病； 1900年，Landsteriner——发现人类血型并于1930年获得了诺贝尔奖金。 1)直接凝集反应（以玻片法为例） 颗粒性抗原(细菌,红细胞等)直接与相应的抗体结合,在有电解质存在的等一定条件下出现肉眼可见的凝集团块,称为直接凝集反应. 可以分为玻片法与试管法. 2)间接凝集反应 将可溶性抗原(抗体)吸附于适应的载体,在一定的环境中与相应的抗体(抗原)发生反应生成肉眼可见的凝集物. 可溶性抗原 存在于宿主组织或体液中游离的抗原物质。 可溶性抗