细胞及遗传学实验.docVIP

细胞及遗传学实验 目 录 实验一 细胞膜的渗透性………………………………1 实验二 细胞凝集反应……………………………........2 实验三 巨噬细胞吞噬现象的观察……………………3 实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察…………6 实验五 DNA的Feulgen染色法..................10 实验六 动物染色体标本的制备与观察………………12 实验七 植物染色体标本的制备与观察………………15 实验八 联会复合体的染色与观察................17 实验九 果蝇的形态和生活史观察………………….....18 实验十 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察………….21 实验十一 人体X～染色质（巴尔小体）的观察.......22 实验十二 人体外周血细胞培养及染色体制备和观察….24 实验一 细胞膜的渗透性 实 验 目 的 了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。 实 验 原 理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质透入速度互不相同。 实 验 用 品 一、器材 50ml小烧杯，10ml移液管，试管（1～10ml）,试管架。 二、氯化试剂 0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸胺、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮。 三、材料 兔血。 实 验 方 法 一、兔血细胞悬液 取50ml小烧杯一只，加1份兔血和10份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的兔血。 二、低渗溶液 取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的兔血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 三、兔红细胞的渗透性 1．取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？ 2．取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。 3．分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验。步骤同2。 实 验 结 果 将观察到的现象列入表6-1，对实验结果进行比较和分析。 表6-1 不同低渗溶液下的溶血现象 试管编号 是否溶血 时间 结果分析 1．10ml氯化钠+1ml稀释兔血 2．10ml氯化铵+1ml稀释兔血 3．10ml醋酸胺+1ml稀释兔血 4．10ml硝酸钠+1ml稀释兔血 5．10ml草酸铵+1ml稀释兔血 6．10ml硫酸钠+1ml稀释兔血 7．10ml葡萄糖+1ml稀释兔血 8．10ml甘油+1ml稀释兔血 9．10ml乙醇+1ml稀释兔血 10．10ml丙酮+1ml稀释兔血 实验二 细胞凝集反应 实验原理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化 ，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 实验用品 1. 土豆块茎。 2. 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。 3.PBS缓冲液 称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 0.43g、加蒸馏水，定容至1000ml,调PH值到7.2. 4.2％的红细胞 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞液。 实验方法 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 用滴管吸取土豆凝集素和2％红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，精致20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。 以PBS液加2％血细胞液作对照试验。 作业 简图表示血细胞凝集原理 实验三 巨噬细胞吞噬现