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本科生基因工程实验论文 指导教师 王郑 苏慧敏 学 生 王大伟 专 业 生物科学 年 级 2012级 2015 年 8 月 10 日 碱性磷酸酶基因 表达载体的构 建及在大肠杆菌中的表达 内蒙古大学生命科学学院生物系本科生基因工程实验论文 碱性磷酸酶基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 刘帆 生物科学 摘要碱性磷酸酶广泛分布于人体各脏器器官中这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸 基团从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。碱性磷酸酶在酶联 免疫等生化检测中有重要作用是许多生化反应试剂盒的检测酶。从大肠杆菌提取的碱 性磷酸酶成本低热稳定性好而且能用基因方法实现蛋白质定向标记等。本文主要介 绍利用基因工程实验技术操作碱性磷酸激酶基因将已经连接在pMD19-T载体上的碱性 磷酸激酶酶源基因用PCR扩增出837bp的碱性磷酸激酶的基因片段与T载体连接后导 入感受态的DH5α菌中筛选鉴定。用双酶切切下碱性磷酸激酶的成熟基因片段插入带 有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-his导入 BL(21)DE3感受态菌中诱导表达碱性 磷酸激酶蛋白质用SDS鉴定。 关键词碱性磷酸酶 基因表达 载体 大肠杆菌 SDSConstruction and Expres