细胞凋亡检测.ppt

第十三章 细 胞 凋 亡 检 测 细胞凋亡的几种检测方法 形态学观察：普通光镜、荧光显微镜、透射电子显微镜 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 线粒体膜势能的检测 DNA片断化检测：大分子染色体DNA片段、 DNA Ladder 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 （terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL） 半胱氨酸蛋白酶Caspase家族活性的检测 细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后是细胞质密度增加，核质浓缩，核膜核仁破碎，胞膜有小泡状形成，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结构仍然完整，最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体。 形态学观察 光学显微镜和倒置显微镜：体积缩小、核深染、核碎裂、 凋亡小体形成、无炎症反应 荧光显微镜和激光共聚焦显微镜： DNA特异性染料 （ Hoechest 33342/33258, DAPI） 透射电子显微镜：超微结构是诊断凋亡的最可靠指标 电镜下：凋亡的细胞皱缩，质膜完整，胞浆致密，细胞器密集，不同程度退变；核染色质致密，形成形状不一，大小不等的团块边集于核膜处，进而胞核裂解；胞浆发生芽突。胞浆芽突脱落后，形